Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光

货号22659存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格500 Tests价格1944
Ex (nm)597Em (nm)619
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光 是一套荧光成像工具,用于标记亚细胞细胞器,如膜,溶酶体,线粒体,细胞核等。该试剂盒使用专有的溶解性染料,可以通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中,该指示剂的溶质是一种疏水性化合物,很容易渗透完整的活细胞,并被保留在溶酶体内,进入溶酶体后,其荧光显着增强,这一关键特征显着降低了其染色背景。适用于多种不同类型的研究中包括细胞粘附、趋化性、多药耐药性、细胞活力,细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有的必需组分和最佳细胞标记方法,适用于增殖和非增殖细胞,可用于悬浮细胞和贴壁细胞。LysoBrite染料的性能明显优于同等的LysoTracker染料(来自Invitrogen)。LysoBrite染料可以在活细胞中停留一周以上,对细胞的毒性极小,而LysoTracker染料只能使用几个小时,LysoBrite染料可以存活几代细胞。此外,LysoBrite染料比LysoTracker染料具有更高的光稳定性,百萤生物是为您提供最优质的Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒。Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光 是美国AAT Bioquest研发的产品。

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适用仪器


荧光显微镜  
激发:

Texas Red滤波片

发射: Texas Red滤波片
推荐孔板: 黑色透明


产品说明书

试验方案

  1. 准备细胞
  2. 添加LysoBriteDeep Red染料工作溶液
  3. 在37°C孵育30分钟至60分钟
  4. 添加染色缓冲液
  5. 室温孵育30分钟
  6. 在荧光显微镜下Ex/Em =590/620nm(Texas Red滤光片组)处进行分析

注意:1)实验前,取出试剂盒进行室温冻结。

 

样品示例及使用方法

1.准备溶酶体染色溶液:

1.1  取出试剂盒中A、B、C组分,室温避光静置5-10min。

1.2  移取10μL LysoBrite Deep Red(组分A),用5mL细胞染色缓冲液(组分B)进行稀释,制备染料工作液。

注意:1) 10μL的500X LysoBrite Deep Red(组分A)足够完成一个96孔板,根据要求分装并储存未使用的500X LysoBrite Deep Red(组分A),避免反复冻融。

2)荧光溶酶体指示剂的最佳浓度根据实际应用而改变,可以根据探针的渗透性对细胞类型、细胞或组织的染色条件进行调整。

 

2.细胞染色:

  • 对于贴壁细胞:

在96孔黑色墙壁/透明底板(50μL/孔/ 96孔板)或装有适当培养基内的培养皿的盖玻片上培养细胞,当细胞达到所需的汇合时,在96孔板或培养皿内加入1/2的LysoBrite Deep Red工作液,在37℃、5%CO2条件下培养箱中孵育30分钟至60分钟,将(50 µL /孔/96孔板)的染色缓冲液B(组分C)加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室温下孵育15-30分钟。再使用配有Texas Red 滤片组的荧光显微镜观察细胞,使之带深红色荧光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意:1)LysoBrite Deep Red对细胞的毒性很小或没有,它可以用于细胞跟踪。为了进行细胞跟踪,可跳过添加染色缓冲液B的步骤,只需将染料工作液替换为生长培养基,然后在荧光显微镜下观察即可。如果细胞看起来没有充分染色,建议适当增加染料浓度或孵育时间。

 

  • 对于悬浮细胞:

在1000rpm条件下离心培养液5分钟,得到细胞沉淀并弃去上清液,在预热(37℃)生长培养基例如(100 µL /管)中轻轻重悬细胞沉淀,然后添加1/2体积(50 µL /管)LysoBrite Deep Red工作溶液。在37℃、5%CO2条件下培养箱中孵育30分钟至60分钟,将(50 µL /孔/96孔板)的染色缓冲液B(组分C)加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室温下孵育15-30分钟。再使用配有Texas Red 滤片组的荧光显微镜观察细胞,使之带深红色荧光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意:  1)LysoBrite Deep Red对细胞的毒性很小或没有。它可以用于细胞跟踪。为了进行细胞跟踪,可跳过添加染色缓冲液B的步骤,只需将染料工作液替换为生长培养基,然后在荧光显微镜下观察即可。如果细胞看起来没有充分染色,建议适当增加染料浓度或孵育时间。 

        2)悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)处理过的盖玻片上,并作为贴壁细胞染色。

 

示例数据分析及图示

图一:在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒LysoBrite Deep Red染色Hela细胞的荧光成像结果。

图二:HeLa细胞分别用A和B,置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的荧光成像结果,在0秒和120秒的曝光时间下,使用Olympus荧光显微镜对信号进行比较。

A: Cell Navigator溶酶体染色试剂盒(Cat# 22659)、B: LysoTracker®Red DND-99(来自Invitrogen公司)。

 

参考文献

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说明书
Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 深红色荧光.pdf