MitoLite 线粒体橙色荧光探针（EX405）

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产品优势  

1.高特异性：依赖于线粒体膜电位（ΔΨm）选择性积聚在活性线粒体中

2.细胞兼容性：适用于增殖细胞、非增殖细胞，兼容悬浮细胞和贴壁细胞的检测。

3.稳定性好：抗光漂白能力强，适合长时间活细胞成像

4.高信噪比：与普通细胞质染料相比，信噪比更高，成像更清晰

 

适用范围

用于标记活细胞

 

产品介绍

MitoLite™ Orange 405 是一种阳离子染料，能够通过线粒体膜电位梯度（ΔΨm）选择性积聚于线粒体内。该疏水性线粒体探针可轻松穿透活细胞膜，进入细胞后即被截留在线粒体中。由于探针携带细胞滞留基团，其荧光信号可长期稳定保留在线粒体内，从而显著提高染色效率。该标记方案稳定可靠，操作简便，可广泛适配多种荧光检测平台，如微孔板分析、免疫细胞化学和流式细胞术，并适用于增殖或非增殖细胞、悬浮或贴壁细胞。MitoLite™ Orange 405 可被405 nm紫激光高效激发，因此特别适用于配备紫激光源的流式细胞仪

MitoLite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟至2小时

清洗细胞

在荧光显微镜下分析

 

操作步骤

1.线粒体染色工作液配制：

1.1 将MitoLite™染料恢复至室温

1.2 取20 μL 500×MitoLite™染料母液，用Hanks（含20 mM Hepes缓冲液）或自选缓冲液稀释至10 mL，配制成工作浓度

注1：20 μL染料母液可满足1块96孔板使用。未使用的母液需分装后于-15℃以下避光保存，避免反复冻融

注2：理想染色浓度需根据具体应用调整，可根据细胞类型及探针渗透性优化染色条件

 

2.细胞染色步骤：

2.1 贴壁细胞染色：

a) 将细胞培养于96孔黑色壁/透明底培养板（100 μL/孔）或培养皿内的盖玻片上

b) 待细胞达到合适密度后，加入等体积染色工作液（步骤1.2配制）

c)将细胞在 37℃、5% CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时

d) 更换染料上样溶液，或用预热（37℃）的Hanks（含20 mM Hepes缓冲液，HBSS）或自选缓冲液（如1:1稀释的培养基）洗涤细胞（特别是货号#22679产品）。随后向细胞培养孔中加入HBSS缓冲液或培养基。

e) 使用适配滤光片的荧光显微镜观察细胞

注意：若染色不足，可适当提高染料浓度或延长孵育时间  

2.2 悬浮细胞染色：

a) 1000 rpm离心5分钟收集细胞，弃上清

b) 用预热（37℃）培养基重悬细胞，加入等体积染色工作液（步骤1.2）

c) 将细胞在37℃、5% CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时

d) 更换染料上样溶液，或用预热（37℃）的Hanks（含20 mM Hepes缓冲液，HBSS）或自选缓冲液（如1:1稀释的培养基）洗涤细胞（特别是货号#22679产品）。随后向细胞培养孔中加入HBSS缓冲液或培养基。

e) 使用适配滤光片的荧光显微镜观察细胞

注意：1.若染色不足，可适当提高染料浓度或延长孵育时间

          2.悬浮细胞可使用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理盖玻片后，参照贴壁细胞方法染色