Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光

货号22795存储条件f/l
规格200 Tests价格2460
Ex (nm)341Em (nm)441
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过检测Caspase 3的激活来监测细胞凋亡。由于caspase-3(CPP32 / apopain)的激活对于细胞凋亡的启动很重要,因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。Caspase 3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)的底物选择性。该试剂盒使用Ac-DEVD-AMC作为caspase-3活性的荧光指示剂。Caspase 3切割AMC肽会产生强荧光的AMC,该荧光在450-480 nm激发下用340-370 nm的荧光进行监测。该试剂盒可提供所有必需成分,并具有优化的测定方案,该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板,每孔使用100 uL试剂,试剂足够200次检测。该试剂盒以384孔板,每孔使用25 uL试剂,试剂足够800次检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物制备细胞(100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板)
  2. 加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液
  3. 在室温下孵育1小时
  4. 检测Ex / Em = 350/450 nm(截止= 420 nm)的荧光强度

 

溶液配制

工作溶液配制

将50 µL Caspase 3/7底物(组分A)添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意:将未使用的组分A和B分装并存储在-20℃下。 避免重复冻结/解冻循环。

 

实验步骤

  1. 通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物(96孔板)或5 µL /孔的5X测试化合物(384孔板)来处理细胞。对于空白孔(不含细胞的培养基),添加相同量的化合物缓冲液。
  2. 将细胞板在37°C,5%CO2培养箱中孵育(对于喜树碱处理过的Jurkat细胞,需要4-6小时)以诱导凋亡。
  3. 加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Caspase 3/7底物工作溶液。
  4. 在避光的条件下,在室温下孵育平板至少1小时。注意:如果需要,在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟,向选定样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂,以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
  5. 以800 rpm的速度离心细胞板(特别是非粘附细胞)2分钟(制动)。
  6. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 350/450 nm(截止= 420 nm)处检测荧光强度。

 

图示

 

图1.使用Cell Meter Caspase 3/7活性凋亡测定试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 3/7活性。 当天,将Jurkat细胞以80,000个细胞/孔/ 90 µL的浓度接种在Costar黑色96孔板中。 在有和没有1 µM星形孢菌素的情况下将细胞处理4小时,并在有或没有10 µM的胱天蛋白酶抑制剂AC-DEVD-CHO的情况下处理细胞10分钟。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液(100μL/孔),并在室温下孵育1小时。 在Ex / Em = 360 / 470nm(截止= 420nm)下测量荧光强度。

图2.白蛋白暴露上调了足细胞中的促凋亡途径。 A,活化的半胱天冬酶3/7活性相对于用5mg / ml白蛋白(实心柱)或5mg / ml右旋糖酐(实心柱)处理的足细胞中的总细胞蛋白标准化了指定的时间。 *表示与相应的右旋糖酐处理的对照相比,P <0.0001。 B,用5mg / ml葡聚糖(Dex)或5mg / ml白蛋白(Alb)处理培养的足细胞的TUNEL染色。核用DAPI染成蓝色。 TUNEL阳性细胞核是绿色的。 C,将半胱天冬酶3/7活性标准化为用5 mg / ml白蛋白或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD(泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂)处理的足细胞中的总细胞蛋白。 z VAD很大程度上废除了caspase活性(*,P = 0.01对白蛋白+ z VAD)。 D,用锥虫蓝测定法测定的死细胞百分比,用单独的5 mg / ml白蛋白(空心柱)或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD(实心柱)处理24小时或5 mg / ml的足细胞单独使用白蛋白(水平阴影线)或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD 48小时(垂直阴影线)。 *表示在48小时时与白蛋白+ z-VAD相比,P = 0.001。 * Caspase活性是根据制造商的指导使用Caspase 3/7活性试剂盒(AAT Bioquest,Sunnyvale,CA)确定的。资料来源:Graph from Endocytosis of Albumin by Podocytes Elicits an Inflammatory Response and Induces Apoptotic Cell Death by Kayo Okamura, et al., PLoS ONE, Jan. 2013.

 

 

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说明书
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