Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

货号22797存储条件f/l
规格100 Tests价格3720
Ex (nm)532Em (nm)619
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂盒,我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量Caspase 3的激活来监测细胞凋亡。由于caspase-3(CPP32 / apopain)的激活对于细胞凋亡的启动很重要,因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。半胱天冬酶3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)的底物选择性。该试剂盒使用Z-DEVD-ProRed 作为caspase-3活性的荧光指示剂。半胱天冬酶3对ProRed DEVD封闭肽残基的切割产生强红色荧光的ProRed ,该荧光在〜620 nm处以荧光光谱法进行监测,激发波长约为530 nm。该试剂盒可提供所有必需成分,并具有优化的测定方案,该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板每孔使用100 uL试剂,可提供足够的试剂来执行100次测定。该试剂盒以384孔板每孔使用25 uL试剂,可提供足够的试剂来执行400次测定。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度(截止= 610 nm)

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液(200X):将65 µL DMSO加到Z-DEVD-ProRed (组分A)的小瓶中,制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液,避光储存。

 

工作溶液配制

将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意:分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液(来自步骤2.2)和测定缓冲液(组分B)。 避免重复冻结/解冻循环。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

1.准备细胞:

1.1 对于贴壁细胞:将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔,或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔,过夜培养。

1.2 对于非贴壁细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中,用于96孔;或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前,将板以800 rpm的速度离心2分钟。 注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物(96孔板)或5 µL /孔的5X测试化合物(384孔板)来处理细胞。对于空白孔(不含细胞的培养基),添加相同量的化合物缓冲液。

3.将细胞板在37°C,5%CO2的培养箱中孵育(对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时)以诱导凋亡。

4.加入Caspase 3/7底物工作溶液(100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板。)

5.在避光的条件下,在室温下孵育平板至少1小时。注意:如果需要,在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟,向选定的样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂,以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。

6.使用荧光酶标仪(Ex / Em = 540/620 nm(截止= 610 nm))监控荧光强度。注意:有时,底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式,则以800 rpm的速度离心细胞板(特别是非粘附细胞)2分钟(制动)。

 

图示

 

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 当天,将Jurkat细胞以200,000个细胞/ 90 µL /孔的密度接种在Costar黑色96孔板中。 用或不用1 µM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7工作溶液(100 µL /孔)并在室温下孵育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪(Molecular Devices)在Ex / Em = 540/620 nm(截止= 610 nm)下测量荧光强度。

 

 

参考文献

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