Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

货号22798存储条件f/l
规格200 Tests价格2460
Ex (nm)500Em (nm)522
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒,Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白,CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中,例如亨廷顿综合症,caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性,其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使用(Ac-IETD)2-R110作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割R110肽产生强绿色荧光,其发射光在520 nm和530 nm之间,激发光为480 nm和500 nm之间。这种特性使得试剂盒能适合于FITC滤光器。本试剂盒提供所有必需组分和最佳操作流程。该实验结果稳定,快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加(截止= 515 nm)

 

工作溶液配制

将50μLCaspase8底物(组分A)加入10mL测定缓冲液(组分B)中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液。 避光。 注意:Caspasae 8工作液不稳定,请及时使用。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物(96孔板)或5μL/孔的5X测试化合物(384孔板)加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5%CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间(对于用喜树碱或星形孢菌素处理的Jurkat细胞,4-6小时)以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Caspase 8工作溶液。

4.将板在室温下孵育30分钟至1小时,避光。注意:如果需要,在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前,向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂,以确认对caspase 8样活性的抑制作用。

5.以800rpm离心细胞板(特别是对于非贴壁细胞)2分钟(制动关闭)。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm(截止= 515nm)下监测荧光增加。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的caspase 8活性。 在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000个细胞/90μL/孔接种Jurkat细胞。 用或不用20μM喜树碱处理细胞4小时。 加入半胱天冬酶8工作溶液(100μL/孔)并在室温下温育1小时。 使用FlexStation 酶标仪(Molecular Devices)在Ex / Em = 490 / 525nm(截止值= 515nm)下测量荧光强度。

 

参考文献

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说明书
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