Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测
货号22801存储条件F/L
规格100 Tests价格3540
Ex (nm)510Em (nm)525
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞仪检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒,JC-1在许多实验室中被广泛使用,但其水溶性差导致极大的不便。即使在1μM浓度下,JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时,JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比,JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体,并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm(即JC-10单体形式的发射)向570nm(即J-聚集体形式的发射)的移动。当在490nm处激发时,随着线粒体膜变得更加极化,JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1(FL1)中分析绿色发射,在通道2(FL2)中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外,它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测,并为监测线粒体膜电位变化提供了最强大的检测方法。
        这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测,并为监测线粒体膜电位变化提供了最可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中,JC-10浓缩在线粒体基质中,在那里形成红色荧光聚集体。然而,在凋亡和坏死细胞中,JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡激活剂和抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

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产品说明书

96孔板样品分析

概述

用密度为5×105到1×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

用500μL1XJC-10染料加载溶液重悬细胞(2-5×105细胞/管)

37°C孵育/ 室温15-30分钟

用流式细胞仪分析FL1通道(绿色荧光单体信号)和FL2通道(橙色荧光聚合信号)

 

操作方法

1.准备细胞:
以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。
注意:应根据个体评估每个细胞系,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

 

2.准备JC-10染料加载溶液:
2.1使用前在室温下清洗所有试剂盒中的试剂。
2.2将25μL的200X JC-10(组分A)加入5mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。
注意:将未使用的200X JC-10(组分A)等分并保存在-20℃。 避免反复冻/融循环。

 

3.运行JC-10测定:
3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间以诱导细胞凋亡。设置并行控制实验。
对于阴性对照:仅用载体处理细胞。
对于阳性对照:在37℃,5%CO2培养箱中用2-10μM的FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。
注意:CCCP或FCCP可与JC-10染料加载溶液同时添加(来自步骤2.2)。可能需要滴定CCCP或FCCP以获得具有单个细胞系的最佳结果。
3.2离心细胞,每管2-5×105个细胞。
注意:对于贴壁细胞,用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞摄入,用含有血清的培养基洗涤细胞一次,然后用JC-10染料加载溶液孵育(参见步骤3.3)。
3.3在500μLJC-10染料加载溶液中重悬细胞(来自步骤2.2)。
3.4在室温下或在37℃,5%CO2培养箱中孵育染料装载细胞15-60分钟,避光。
注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5通过在FL1通道中使用流式细胞仪检测荧光强度,获得绿色荧光单体信号(在凋亡细胞中),并使用FL2通道检测橙色荧光聚集信号(在健康细胞中)。建议使用FCCP或CCCP处理的细胞进行补偿校正(见附录)。

 

数据分析

1.在活的非凋亡细胞中,JC-10作为细胞溶质染色绿色中的单体存在,并且还在线粒体染成红色的聚集体中积累。 在凋亡细胞和死细胞中,JC-10仅以单体形式存在,染色细胞溶质绿。
2.使用FL2通道可检测到健康细胞中含有红色JC-10聚集体的线粒体。 通过使用FL1通道(FITC)可检测凋亡细胞中的绿色JC-10单体。
3. FL1与FL2的强度比用于监测化合物处理诱导的线粒体膜电位变化。

图1. FCCP诱导的JurKat细胞线粒体膜电位变化的影响。 将JurKat细胞染色载有JC-10染料加载溶液以及DMSO(Top)或5μMFCCP(低)10分钟。 使用FL1和FL2通道,用FACSCalibur(Becton Dickinson,San Jose,CA)流式细胞仪测量J-聚集体和单体形式JC-10的荧光强度。 将未补偿的数据(左栏)与补偿数据(右栏)进行比较。

 

参考文献

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产品名称 货号
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 Cat#22800


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