Cell Meter APC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

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产品优势

高灵敏度与特异性：通过结合外翻的PS，高效检测早期凋亡细胞。

非放射性检测：提供安全、简便的凋亡检测方法，无需放射性物质。

适用范围

用于细胞凋亡检测

产品介绍

膜联蛋白V（Annexin V）可与APC等荧光染料偶联，形成的复合物仍保持对磷脂酰丝氨酸（PS）的高亲和力，是流式细胞术检测凋亡细胞的灵敏探针。由于PS外翻发生于凋亡早期，APC-Annexin V染色能比DNA断裂等核变化的检测方法更早识别凋亡。APC-Annexin V的阳性信号出现于细胞膜完整性丧失之前（后者是凋亡或坏死终末期的标志），因此通常需联合碘化丙啶（PI）或7-氨基放线菌素D（7-AAD）等膜通透性染料使用，以准确识别早期凋亡细胞。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）

2.加入 APC-Annexin V检测溶液

3.室温孵育20-60分钟

4.使用配备660/20 nm滤光片（(APC通道）的流式细胞仪分析细胞。

储备液的制备

除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分成单次使用的分装，并储存在-20 °C。避免反复冻融

1. APC-Annexin V 储备液 (100X):

向RPE-膜联蛋白V（组分A）瓶中加入200 µL含0.2% BSA的PBS缓冲液，配制100X APC-膜联蛋白V储存液。

注：重新配制的100X APC-膜联蛋白V储存液需保存于4°C，请勿冷冻。

细胞制备指南

详细制备方法请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

实验操作流程

1.使用测试化合物处理细胞诱导凋亡（如：Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时）

注意： 由于在细胞脱离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤，因此不常对贴壁细胞进行 Annexin V 流式细胞术分析。然而，Casiola-Rosen 等人和 van Engelend 等人之前已经报道了在贴壁细胞类型上使用 Annexin V 进行流式细胞术的方法。

2.离心收集细胞（1-5×10⁵细胞/管）

3.用200 µL检测缓冲液（组分B）重悬

4.加入2 µL的 100X APC-Annexin V储备液

可选： 对于坏死细胞，添加2 µL的100X 碘化丙啶（组分C）。

5.室温避光孵育20-60分钟

可选：加入300 µL检测缓冲液（组分B）以增加样本体积。

6.使用660/20 nm滤光片（(APC通道）的流式细胞仪监测RPE-Annexin V的荧光强度；当向细胞中加入碘化丙啶时，使用610/20 nm滤光片（PE-Texas Red通道）测量细胞活力。