Cell Meter PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

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产品优势

高灵敏度与特异性：通过结合外翻的PS，高效检测早期凋亡细胞。

非放射性检测：提供安全、简便的凋亡检测方法，无需放射性物质。

适用范围

用于细胞凋亡检测

产品介绍

膜联蛋白V（Annexin V）可与PE等荧光染料偶联，形成的偶联物仍保持对磷脂酰丝氨酸（PS）的高亲和力，因此可作为灵敏的流式细胞术探针用于检测凋亡细胞。由于PS外翻发生于凋亡早期阶段，PE标记膜联蛋白V（PE Annexin V）染色法能比基于DNA断裂等核变化的检测方法更早识别凋亡。PE Annexin V染色信号的出现先于细胞膜完整性的丧失（后者是凋亡或坏死最终阶段的标志），故通常需联合碘化丙啶（PI）或7-氨基放线菌素D（7-AAD）等活细胞染料使用，以准确区分早期凋亡细胞（7-AAD阴性/PE Annexin V阳性）。

活细胞：细胞膜完整，表现为PE-Annexin V和7-AAD双阴性

早期凋亡细胞：PS外翻但膜完整，表现为PE-Annexin V阳性/7-AAD阴性

晚期凋亡/死亡细胞：膜完整性丧失，表现为双阳性

需注意：该方法无法区分凋亡性死亡与坏死性死亡，因两者最终均呈现双阳性。但通过时序监测可观察到典型凋亡进程：双阴性→PE单阳性→双阳性，这种动态变化是判断凋亡的关键依据。

单次检测中若仅观察到双阳性结果，无法明确细胞死亡机制（凋亡或坏死）。完整评估需结合动态监测：活细胞（双阴性）→早期凋亡（PE单阳性）→终末死亡（双阳性）的连续变化过程才能确证凋亡。因此，实验设计建议设置多时间点检测，以捕捉细胞状态转变的动力学特征。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）

2.加入 RPE-Annexin V检测溶液

3.室温孵育20-60分钟

4.使用配备575/26 nm滤光片（(PE通道）的流式细胞仪分析细胞。

储备液的制备

除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分成单次使用的分装，并储存在-20 °C。避免反复冻融

1. RPE-Annexin V 储备液 (100X):

向RPE-膜联蛋白V（组分A）瓶中加入200 µL含0.2% BSA的PBS缓冲液，配制100X RPE-膜联蛋白V储存液。

注：重新配制的100X RPE-膜联蛋白V储存液需保存于4°C，请勿冷冻。

细胞制备指南

详细制备方法请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

实验操作流程

1.使用测试化合物处理细胞诱导凋亡（如：Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时）

注意： 由于在细胞脱离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤，因此不常对贴壁细胞进行 Annexin V 流式细胞术分析。然而，Casiola-Rosen 等人和 van Engelend 等人之前已经报道了在贴壁细胞类型上使用 Annexin V 进行流式细胞术的方法。

2.离心收集细胞（1-5×10⁵细胞/管）

3.用200 µL检测缓冲液（组分B）重悬

4.加入2 µL的 100X RPE-Annexin V储备液

可选： 对于坏死细胞，添加2 µL的100X Nuclear Red™ DCS（组分C）。

5.室温避光孵育20-60分钟

可选：加入300 µL检测缓冲液（组分B）以增加样本体积。

6.使用配备5575/26 nm滤光片（(PE通道）的流式细胞仪监测APC-Annexin V的荧光强度；当向细胞中加入Nuclear Red™ DCS时，使用660/20 nm滤光片（APC通道）测量细胞活力。