Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

货号22842存储条件f/l
规格100 Tests价格2460
Ex (nm)652Em (nm)682
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力和增殖的工具。有多种参数可用于监测细胞活力和增殖。在正常细胞中,DNA密度根据细胞的生长,分裂,静止执行其正常功能而变化。细胞周期的进程受各种细胞周期调节因子之间复杂的相互作用控制。这些调节剂激活转录因子,该转录因子与DNA结合并开启或关闭导致细胞分裂的蛋白质的产生。这种调节级联中的任何失误都会导致异常细胞增殖,这是许多病理状况(例如肿瘤形成)的基础。活细胞研究的潜在应用是确定细胞DNA含量和细胞周期分布,以检测生长模式的变化,检测凋亡,评估肿瘤细胞的行为和抑制基因的机制。该特定试剂盒旨在使用Nuclear Red CCS1(固定细胞中的细胞周期染色剂)检测细胞周期进程和增殖。染料穿过透化的膜并插入细胞DNA中。试剂盒中提供的RNase降解RNA后,Nuclear Red CCS1的信号强度与DNA含量成正比。可以使用流式细胞仪(FL2通道)检测给定样品中处于G0 / G1,S和G2 / M期的细胞百分比,以及处于凋亡之前的sub-G1期的细胞百分比。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 用70%乙醇固定细胞
  3. 将0.5 µL 100X Nuclear Red CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL细胞溶液中
  4. 在室温下孵育30-60分钟
  5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

 

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞,以诱导凋亡或其他细胞周期功能。

2.对于每个样品,用0.5 mL PBS制备细胞,密度为5×105至1×106细胞/ mL。

2.1对于贴壁细胞:将细胞用胰蛋白酶消化,悬浮在10%FBS培养基中,离心(1000 rpm,5分钟),然后将沉淀重悬于PBS中。

2.2对于悬浮细胞:将细胞离心(1000 rpm,5分钟),并将沉淀物悬浮在PBS(1 mL)中。 注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

3.用70%乙醇固定细胞:

3.1将0.5 mL细胞悬液吸移至1.2 mL无水乙醇中(最终浓度约为70%)。

3.2在冰上孵育细胞至少2小时(或在-20°C过夜)。在染色之前,细胞可以在-20°C下保存2年。注意:在用单克隆抗体染色细胞表面抗原后,通常将乙醇用于固定,而在用单克隆抗体染色细胞内抗原后,通常将甲醇用于固定。在此过程中,将固定并分析整个细胞。由于仍然存在整个细胞团,因此通常包括使用RNase来消除任何双链RNA。尽管已经对整个细胞进行了分析,但尝试检测与DNA结合的某些细胞内抗原的尝试可能会失败,因为蛋白质会从透化的细胞中漏出(例如绿色荧光蛋白)。在这些情况下,在酒精固定之前,用PBS中的1%低聚甲醛进行短暂的预固定(在4-6°C下10分钟),将有助于将蛋白质保留在细胞中。

4.用Nuclear Red CCS1染色细胞:

4.1以1000 rpm的速度沉淀细胞5分钟,并用冷PBS至少洗涤一次。

4.2将沉淀物悬浮在0.5 mL测定缓冲液(组分C)中。

4.3加入5 µL 100X Nuclear Red CCS1(组分A)和5 µL 100X RNase A(组分B)。

4.4在室温下孵育细胞30至60分钟。 注意:适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.5可选:将细胞以1000 rpm离心5分钟,然后将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液(组分B)或自备缓冲液中。

4.6使用FL2通道(Ex / Em = 490/620 nm),通过流式细胞仪检测荧光强度。 

 

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说明书
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