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Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

英文名称:Cell Meter™ Live Cell TUNEL Apoptosis Assay Kit *Green Fluorescence*
产品参数
Ex (nm)498Em (nm)522
分子量-溶剂-
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可以通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口,该缺口可通过TdT进行鉴定,TdT是一种酶,该酶催化添加标记物的dUTP。现有的所有TUNEL分析均包含剧毒的甲胂酸钠,这可能会诱导细胞凋亡并降低DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒使用了不含甲胂酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于将我们专有的荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化,可直接检测分离的或贴壁细胞中的细胞凋亡,而无需使用任何抗体。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。适用于荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪。在流行的FITC通道上可以轻松检测到其信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
Ex: 488 nm
Em: 530/30  nm 
通道: FITC通道

 


荧光显微镜

Ex: FITC 滤波片组
Em: FITC 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪

 
Ex: 490 nm
Em: 520 nm
Cutoff: 510 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物准备细胞。
  2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
  3. 洗涤细胞。
  4. 用4%甲醛(可选)固定细胞。
  5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm(截止= 515 nm)处的荧光强度。

 

溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green(组分A)添加到50μL的反应缓冲液(组分B)中,使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意:应单独评估每个细胞系,以确定细胞密度。

 

实验步骤

1.根据您的特定协议,将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞,我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔,对于非贴壁细胞,建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时,在每种标记条件下,用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意:我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时,以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色:

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液,并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液(组分B)。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选:从步骤5中移出反应缓冲液,并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次,并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm(cut off= 515 nm)的荧光酶标仪,带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选:用1X Hoechst(组分C)在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核,以进行图像分析

 

参考文献

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