活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

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产品优势  

1.仅需1小时孵育即可检测活细胞内的ROS 

2.兼容96/384孔板和高通量液体处理系统；

3.支持荧光酶标仪和荧光显微镜双平台检测

适用范围

用于细胞内ROS检测

产品介绍

活性氧（ROS）是氧代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起关键作用。然而在氧化应激状态下，ROS水平会急剧升高，其过度积累将严重损伤细胞结构。研究表明，氧化应激与心血管疾病、糖尿病、骨质疏松、中风、炎症性疾病、多种神经退行性疾病及癌症的发生发展密切相关。通过精确测量ROS水平，可深入解析氧化应激调控细胞内信号通路的分子机制。

Cell Meter™ 荧光法细胞内总ROS活性检测试剂盒采用我们专利的ROS Brite™ 670探针来定量活细胞中的活性氧（ROS）。这种具有细胞膜通透性且无荧光的ROS Brite™ 670探针在与ROS反应后会发出强荧光信号。该探针定位于细胞质中，其荧光信号可通过荧光显微镜、高内涵成像系统、微孔板荧光计或流式细胞仪进行检测。

本试剂盒提供了一种高灵敏度的一步荧光检测方案，仅需1小时孵育即可检测活细胞内的ROS（尤其是超氧阴离子和羟基自由基）。该检测既可采用96孔或384孔微孔板形式，配合荧光酶标仪进行高通量检测；也可使用配备Cy5滤光片的荧光显微镜进行观察分析。

样品实验方案

简要概述

适用于荧光显微镜、荧光酶标仪

1.在生长培养基中准备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS

3.加入ROS Brite 670工作溶液（96孔板为100 µL /孔；384孔板为25 µL /孔）

4.将细胞在37°C下染色30-60分钟

5.在Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）或配备cy5滤光片的荧光显微镜下检测荧光的增加（底部读取模式）

流式细胞仪

1.在生长培养基中准备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS

3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟

4.使用带有APC通道的流式细胞仪检测荧光强度

细胞样本制备
有关细胞样本制备的指南，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C环境中。避免反复冻融

1. ROS Brite 670储备液（500X）：

向ROS Brite™ 670（组分A）的瓶中加入40 µL二甲基亚砜（组分C），充分混匀配制成500X ROS Brite™ 670储备液。需避光保存。

注：20 µL 500X ROS Brite™ 670储备液可满足1块检测板的用量。若用于流式细胞仪，可将500X ROS Brite™ 670储备液用二甲基亚砜稀释5倍至100X以方便使用。储存时请确保管盖密封。

工作溶液配制

将20 µL 500X ROS Brite™ 670储备液加入10 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀，配制成ROS Brite™ 670工作液。

注意：此ROS Brite 670工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

方案A:荧光显微镜和荧光酶标仪：

1. 96孔板：向细胞中加入10 µL 10X待测化合物溶液（使用PBS或HHBS等缓冲液配制），对照组加入等体积缓冲液。384孔板：向细胞中加入5 µL 5X待测化合物溶液（使用PBS或HHBS等缓冲液配制），对照组加入等体积缓冲液。

2.将细胞板置于室温或37℃、5% CO₂培养箱中孵育指定时间（例如：HeLa细胞使用100 µM叔丁基过氧化氢(TBHP)处理30分钟）

3.96孔板：每孔加入100 µL ROS Brite™ 670工作液；384孔板：每孔加入25 µL ROS Brite™ 570工作液添加到细胞板中

4.将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30分钟至60分钟。

5.使用荧光酶标仪检测（底部读数模式）：Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）或使用CY5滤光片的荧光显微镜观察

方案B:流式细胞仪：

1.调整细胞密度至5×10⁵~1×10⁶ cells/mL

注：需根据细胞系特性优化凋亡诱导的最合适细胞密度

2.使用PBS或HHBS等缓冲液配制待测化合物，对照组加入等体积缓冲液

3. 要诱导ROS，在室温或37°C、5% CO₂培养箱中孵育≥30分钟（例如：HeLa细胞使用100 µM TBHP处理30分钟）

4.按每mL细胞悬液加入1 µL 500X ROS Brite™ 670储备液，或加入5 µL 100X ROS Brite™ 670储备液

注：1µL/mL 表示每毫升细胞培养基中添加的ROS Brite 570储备液体积为1ul。这个浓度是相对细胞培养基的总体积而言，也可以说是在每升细胞培养基中添加1mL ROS Brite 570储备液。这种浓度通常用于细胞实验中，以使得实验物质与细胞有良好的相互作用，同时不会对细胞造成太大的毒性影响。该浓度仅为初学者进行指导，请根据自己的实际情况，调整浓度，优化自己的实验。

5.将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用APC通道的流式细胞仪检测荧光强度。

试剂应用文献