Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

货号22903存储条件f/l
规格200 Tests价格2460
Ex (nm)658Em (nm)675
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂盒,活性氧(ROS)是氧正常代谢的天然副产物,在细胞信号传导中起重要作用。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病,糖尿病,骨质疏松症,中风,炎性疾病,许多神经退行性疾病和癌症中的作用已得到公认。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 670探针来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后,可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 670表现出很强的荧光信号。ROS Brite 670探针位于细胞质中。ROS Brite 670探针的荧光信号可以通过荧光显微镜,高含量成像,荧光酶标仪或流式细胞仪进行测量。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法,可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS(尤其是超氧化物和羟基自由基)。可以使用荧光酶标仪或带有Cy5滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板进行检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。 



产品说明书

样品实验方案

简要概述

适用于荧光酶标仪、荧光显微镜

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)
4.将细胞在37℃下染色30-60分钟
5.在Ex / Em = 650/675 nm(截止= 665 nm)或使用TRITC滤光片组的荧光显微镜下检测荧光(底部读取模式)

 

适用于流式细胞仪

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用具有FL2通道的流式细胞仪监测荧光强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. ROS Brite 670原液(500X):
将40μLDMSO(组分C)加入到ROS Brite 670(组分A)的小瓶中并充分混合以制备500X ROS Brite 670储备溶液。 避光。 注意:20μL的500X ROS Brite 670原液足以容纳1个平板。对于流式细胞仪,为方便起见,可将5倍ROS Brite 670储备液稀释5倍至DMSO中。为了存放,请将管子紧紧密封。

 

2.工作溶液配制

        将20μL500XROS Brite 670储备溶液加入10 mL分析缓冲液(组分B)中,充分混合,制成ROS Brite 670工作溶液。 注意:此ROS Brite 670工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

(适用于荧光酶标仪、荧光显微镜)

1.用10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384孔板)在所需缓冲液(如PBS或HHBS)中处理细胞。对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导ROS,将细胞板在室温下或在5%CO2,37℃培养箱中孵育一段时间(例如:用100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)处理Hela细胞30分钟)。

3.向细胞板中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ROS Brite 670工作溶液。

4.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30分钟至60分钟。

5.使用荧光酶标仪(底部读取模式)在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)检测荧光增加,或使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

 

(适用于流式细胞仪)

1.以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。 注意:应根据个体评估每个细胞系,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.用所需缓冲液(如PBS或HHBS)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。

3.为诱导ROS,将细胞板在室温或5%CO2,37°C培养箱中孵育至少30分钟(用100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)处理的Hela细胞30分钟)。

4.将1μL/ mL细胞的500X ROS Brite 670储备溶液或5μL/ mL细胞的100X ROS Brite 670储备溶液加入细胞培养基中。

5.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用具有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒检测HeLa细胞中的ROS。 将HeLa细胞以15,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色孔板中过夜。 未处理细胞(对照)或用1mM H2O2或100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)在37℃处理30分钟。 加入ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔)并在5%CO2,37℃培养箱中温育1小时。 使用FlexStation(Molecular Devices)在底部读取模式下在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)下检测荧光信号。

 

参考文献

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Notoginsenoside R1 attenuates high glucose-induced endothelial damage in rat retinal capillary endothelial cells by modulating the intracellular redox state
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Authors: Hoang Ha
Journal: Unknown

 

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说明书
Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光 .pdf