ReadiUse 预活化RPE-iFluor 647 Tandem

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产品优势  

1.提高反应效率：通过活化试剂，使其更容易与目标分子结合

2.简化实验流程：预活化后，无需再进行复杂的活化步骤，可直接使用

3.多色检测能力：适用流式细胞术的多色成像，避免光谱重叠

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

R-藻红蛋白（PE） 是从红藻中分离得到的。它的主要吸收峰位于 565 nm，次要吸收峰位于 496 nm 和 545 nm。AAT Bioquest的RPE-iFluor® 647 串联染料是RPE-Cy5® 和 RPE-Alexa Fluor® 647串联染料的替代品，它们的光谱几乎完全相同。

ReadiUse™ 预活化 PE-iFluor® 647 串联染料是一种活化的PE蛋白，可以轻松与抗体偶联，其偶联效率远高于传统的 PE。

概览

重要提示：PE-iFluor™ 647 串联染料已使用我们的 Buccutite™ FOL 进行预修饰。您的抗体（或其他蛋白质）需使用我们的 Buccutite™ MTA 进行修饰，得到 MTA 修饰的蛋白质。MTA 修饰的蛋白质会与提供的 FOL 修饰的 PE-iFluor™ 647 串联染料轻松反应，生成所需的 PE-iFluor™ 647 串联染料-抗体偶联物。

实验方案示例

使用 Buccutite™ MTA 制备预活化的抗体

1.将 Buccutite™ MTA 溶于 DMSO 中，浓度约为 10 mg/mL。

注意：未使用的 MTA 应储存于 -20°C，可承受最多两次冻融循环。

2.将目标抗体（Ab）配制在 pH = 8.5–9.0 的缓冲液中，浓度需高于 1 mg/mL。

3.按每 100 µg 抗体加入 8–10 µg MTA 的比例，将 MTA 添加到抗体溶液中。

4.充分混匀，在室温下反应 60 分钟，反应过程中需旋转混合。

5.使用脱盐柱纯化反应混合物，去除未反应的 MTA，并将缓冲液置换为 PBS 或其他所选缓冲液。

6.收集 MTA 活化的抗体。按原始起始量的 70% 得率估算其浓度。

与预活化的 PE-iFluor™ 647 串联染料偶联

1.将预活化的 PE-iFluor™ 647 串联染料溶于 100 µL 去离子水中，配成 10 mg/mL 的溶液。

注意：溶解后的预活化 PE-iFluor™ 647 串联染料不稳定，保存时间不得超过一个月。

2.按每 100 µg MTA 活化的抗体加入 300 µg PE-iFluor™ 647 串联染料的比例，将预活化的 PE-iFluor™ 647 串联染料直接加入到 MTA 活化的目标抗体溶液中。

3.在室温下旋转混合 1–2 小时。

4.此时抗体/PE-iFluor™ 647 串联染料偶联物即可使用。

注意：抗体偶联物应在含有载体蛋白（例如 0.1% 牛血清白蛋白）和 0.02–0.05% 叠氮化钠的条件下，以 >0.5 mg/mL 的浓度储存。

注意：抗体/PE-iFluor™ 647 串联染料偶联物可在 4°C 下保存两个月。

5.可选步骤：抗体/PE-iFluor™ 647 串联染料偶联物可进一步通过尺寸排阻色谱法纯化以获得好的性能。