Cell Meter 荧光法细胞电压检测试剂盒

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适用范围

监测细胞膜电位变化，适用于调控离子通道化合物的筛选。

产品介绍

几乎所有细胞质膜都存在跨膜电位，通常表现为膜内侧相对外侧呈负电位。当膜上某处离子通道开启或关闭时，会引发局部膜电位变化从而产生信号。这种电场变化能迅速影响相邻或远端离子通道，导致这些通道随电位变化而启闭，实现信号传递。

Cell Meter™荧光法细胞电压检测试剂盒采用FRET荧光对（VSB 405与VSR 555）监测细胞膜电位变化。疏水性探针VSB 405主要定位于脂膜外层，而VSR 555的定位则对膜电位高度敏感。静息状态下，膜内层负电位使VSR 555紧邻细胞膜外层分布，与蓝色荧光探针VSB405近距离结合，从而高效实现从蓝光（VSB 405）到红光（VSR 555）的荧光共振能量转移。当细胞去极化时，VSR 555向膜内层迁移，导致FRET对分离且能量转移中断。蓝光/红光荧光强度比与细胞电压呈正相关。本检测体系适用于调控离子通道化合物的筛选。

适用仪器

实验步骤摘要

1.按需培养细胞

2.加入VSB405负载溶液，室温孵育45分钟

3.移除VSB405负载溶液，用Voltage Assay Buffer I洗涤细胞

4.加入VSR555负载溶液，室温孵育15分钟

5.在加入去极化刺激剂前后，分别测定Ex1/Em1 = 405/460 nm和Ex2/Em2 = 405/580 nm的荧光响应

注意事项
实验开始前，请将试剂盒所有组分平衡至室温。

标准操作说明

（除非特别说明，所有未使用的母液均应分装为单次用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融）

储备溶液配制

VSB405储备溶液（100X）

向VSB405（组分A）中加入100 µL DMSO（组分F），混匀。
*注：未使用的VSB405母液需分装保存于-20°C*
注：在指定储存条件下，VSB405母液可稳定保存至少1个月

 VSR555储备溶液（100X）
向VSR555（组分C）中加入100 µL DMSO（组分F），混匀。
*注：未使用的VSR555母液需分装保存于-20°C*
注：在指定储存条件下，VSR555母液可稳定保存至少1个月

工作液配制

VSB405工作液
向1 mL Voltage Assay Buffer I（组分D）中加入10 µL 100X Pluronic® F127（组分B），混匀后加入10 µL VSB405母液，充分混合。
注：VSB405负载工作液需现配现用，不可储存

VSR555工作液
向1 mL Voltage Assay Buffer II（组分E）中加入10 µL VSR555母液，混匀。
注：VSR555负载工作液需现配现用，不可储存

标准实验方案
以下方案可作为操作指南，请根据实际需求进行优化

1.按实验需求培养细胞

2.移除细胞培养基，加入100 µL Voltage Assay Buffer I（组分D）

3.立即吸除缓冲液

注：无需使用Voltage Assay Buffer I进行孵育或震荡

4.每孔加入100 µL VSB405工作液，室温避光孵育45分钟（培养板需加盖避光）

5.移除VSB405工作液，使用100 µL Voltage Assay Buffer I洗涤细胞，吸除洗涤缓冲液

6.每孔加入100 µL VSR555工作液，室温避光孵育15分钟

7.使用酶标仪检测（参数设置：Ex1/Em1=405/460 nm；Ex2/Em2=405/580 nm）

检测流程：

a) 先测定静息电位状态读数

b) 注入去极化缓冲液（如高钾缓冲液）

c) 进行连续多次读数

*重要提示：

待测化合物应在VSR555负载后立即加入

刺激剂需在数据采集过程中加入*