Screen Quest Fluo-8 去除培养基钙检测试剂盒*适合于难检测细胞系*

产品货期

咨询

产品优势  

均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙流检测法是药物研发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Fluo-8 NW钙检测试剂盒提供了一种均相荧光检测方案，可用于监测细胞内钙离子动态变化。表达目标GPCR并通过钙信号传导的细胞需预先加载我们专利开发的Fluo-8 NW探针，该探针能自由穿透细胞膜。Fluo-8 NW是目前高通量筛选（HTS）中最明亮的钙离子荧光指示剂。

探针进入细胞后，其疏水性封闭基团会被非特异性细胞酯酶水解，形成带负电荷的荧光染料滞留胞内，与钙离子结合后荧光强度显著增强。当细胞受到筛选化合物刺激时，受体信号触发细胞内钙释放，使Fluo-8 NW的荧光信号急剧升高。该探针具有长波长、高灵敏度等特性，与钙离子结合后荧光强度可提升100-250倍，是检测细胞钙信号的理想指示剂。

Screen Quest Fluo-8 NW钙检测试剂盒提供了经过优化的检测方案，适用于监测G蛋白偶联受体（GPCRs）和钙通道活动。该检测可采用标准96孔或384孔微孔板模式，并能轻松实现自动化操作。

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞

2.去除生长培养基

3.添加Fluo-8 NW染料工作溶液

4.在室温下孵育1小时

5.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

溶液配制

储存溶液配制

除非除非另有说明，所有未使用的储备溶液均应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融。

 Fluo-8 NW储备溶液

货号36307：向Fluo-8 NW（组分A）中加入10 µL DMSO，充分混匀

货号36308及36309：向Fluo-8 NW（组分A）中加入100 µL DMSO，充分混匀

注：10 µL Fluo-8 NW储备溶液可满足一块板的需求

检测缓冲液储备液（1X）：

货号36307和36308：将9 mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic® F127 Plus（1 mL，组分B），混匀

货号36309：将整瓶10X Pluronic® F127 Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（试剂盒未包含），混匀

注：10 mL 1X检测缓冲液可满足一块板的需求

工作溶液配制

将10μLFluo-8 NW DMSO储备溶液加入10mL 1X测定缓冲液中并充分混匀。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

细胞样本制备指南详见：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.去除细胞板中的生长培养基。

此步骤对降低背景荧光及避免化合物与血清/培养基的干扰至关重要

*替代方案：使用含0.5%-1% FBS的生长培养基培养细胞，可省去除培养基步骤。此时需使用HHBS缓冲液配制的2X染料工作液*
（我们提供两款免洗钙检测试剂盒（货号36315和36316），专为使用0.5%-1% FBS培养基的用户设计）

2..将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8NW染料工作溶液加入到细胞板中。

3.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：若需37°C检测，孵育后应立即实验，无需室温静置；若细胞可耐受更长时间室温处理，建议总孵育时间不超过2小时

4.用HHBS或所需缓冲液制备复合板。

6.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。

注意：1.实验前必须进行信号测试，不同仪器强度范围各异。

          2.建议将测试信号强度调整为最大值的10%-15%（例如FLIPR-384最大荧光强度为65,000时，仪器应设置为7,000-10,000）

试剂应用文献