Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

货号36315存储条件f/l
规格10 Plates价格4356
Ex (nm)495Em (nm)516
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒,Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定,用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的感兴趣的GPCR的细胞预加载有可以穿过细胞膜的Fluo-8 NW。一旦进入细胞内,Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被酯酶裂解,导致带电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后,其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体发出细胞内钙的释放信号,这显着增加了Fluo-8 NW的荧光。 Fluo-8 NW具有长波长,高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性,是测量细胞钙的理想指标。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒为监测G蛋白偶联受体和钙通道提供了一种优化的检测方法。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙检测试剂盒。

点击查看光谱



产品说明书

样品分析方案

概述

用含有0.5-1%FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞:
1.1对于粘附细胞:在生长培养基中将细胞过夜,对于96孔板,具有0.5-1%FBS,40,000至80,000个细胞/孔/100μL,或者对于384孔板,为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非粘附细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中(参见下面的步骤2.4),125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前,在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意:应根据个体评估每个细胞系,以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

 

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液:
2.1在使用前,在室温下1小瓶Fluo-8 NW(组分A),1瓶10XPluronic®F127Plus(组分B)和HHBS(组分C)。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL(Cat#36314)或200μL(Cat#36315和#36316)DMSO到Fluo-8 NW(A组分)小瓶中,混匀。
注意:20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封,未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光,避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液:
一个)。对于Cat#36314(1个试剂盒)和#36315(10个试剂盒试剂盒),通过将9mL HHBS(组分C)加入10X Pluronic F127 Plus(1mL,组分B)中制备1X测定缓冲液,并充分混合。

B)。对于Cat#36316(100个试剂盒试剂盒),将整瓶10XPluronic®F127Plus(10 mL,组分B)加入90 mL HHBS缓冲液(不包括在试剂盒中)中,制成1X试剂缓冲液,并充分混合。
注意:对于一个平板,10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光,避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液:将20μLFluo-8 NW储备溶液(来自步骤2.2)加入10 mL 1X分析缓冲液(来自步骤2.3),并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行钙测定:
3.1将100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Fluo-8 NW染料加载溶液(来自步骤2.4)加入到细胞板中。
注意:或者,在含有5-10%FBS的生长培养基中培养细胞以改善细胞生长。在这种情况下,重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以最小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒(Cat#36308和36309)]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟,然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1:如果测定需要37℃,立即进行实验,无需进一步室温孵育。
注2:如果细胞在室温下运行时间较长,可在室温下孵育细胞板1-2小时(建议孵育时间不超过2小时。)

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意:在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10%至15%的水平。例如,FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000,因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

参考文献

A Long-Acting PYY3--36 Analog Mediates Robust Anorectic Efficacy with Minimal Emesis in Nonhuman Primates
Authors: Shamina M Rangwala, Katharine D’Aquino, Yue-Mei Zhang, Lindsay Bader, Wilson Edwards, Songmao Zheng, Annette Eckardt, Ann Lacombe, Rebecca Pick, Veronica Moreno
Journal: Cell Metabolism (2019)

Oxidative Insults and Mitochondrial DNA Mutation Promote Enhanced Autophagy and Mitophagy Compromising Cell Viability in Pluripotent Cell Model of Mitochondrial Disease
Authors: Dar-Shong Lin, Yu-Wen Huang, Che-Sheng Ho, Pi-Lien Hung, Mei-Hsin Hsu, Tuan-Jen Wang, Tsu-Yen Wu, Tsung-Han Lee, Zo-Darr Huang, Po-Chun Chang
Journal: Cells (2019): 65

Prosocial effects of an oxytocin metabolite, but not synthetic oxytocin receptor agonists, in a mouse model of autism
Authors: Sheryl S Moy, Brian L Teng, Viktoriya D Nikolova, Natallia V Riddick, Catherine D Simpson, Amy Van Deusen, William P Janzen, Maria F Sassano, Cort A Pedersen, Michael B Jarstfer
Journal: Neuropharmacology (2019): 301--311

Human iPS cell-derived cardiac tissue sheets for functional restoration of infarcted porcine hearts
Authors: Masanosuke Ishigami, Hidetoshi Masumoto, Takeshi Ikuno, Takayuki Aoki, Masahide Kawatou, Kenji Minakata, Tadashi Ikeda, Ryuzo Sakata, Jun K Yamashita, Kenji Minatoya
Journal: PloS one (2018): e0201650

Structural characterization of agonist binding to protease-activated receptor 2 through mutagenesis and computational modeling
Authors: Amanda J Kennedy, Flavio Ballante, Johan R Johansson, Graeme Milligan, Linda Sundström, Anneli Nordqvist, Jens Carlsson
Journal: ACS Pharmacology & Translational Science (2018): 119--133

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2017)

A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
Authors: Xiaoyuan Gong, Wenbin Xie, Bin Wang, Lingchuan Gu, Fuyou Wang, Xiang Ren, Cheng Chen, Liu Yang
Journal: Scientific reports (2017): 17093

Analysis of Ca2+ response of osteocyte network by three-dimensional time-lapse imaging in living bone
Authors: Tomoyo Tanaka, Mitsuhiro Hoshijima, Junko Sunaga, Takashi Nishida, Mana Hashimoto, Naoya Odagaki, Ryuta Osumi, Taiji Aadachi, Hiroshi Kamioka
Journal: Journal of Bone and Mineral Metabolism (2017): 1--10

Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
Journal: Environmental Pollution (2017): 775--786

 

相关产品

产品名称 货号
Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 Cat#36317
Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 Cat#36325
Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒 Cat#36320


说明书
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒.pdf