Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

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产品优势  

均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子流检测技术是药物研发领域筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙检测试剂盒基于均相荧光检测原理，可精准监测细胞内钙离子动态变化，为GPCR研究提供高效解决方案。

Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙检测试剂盒采用专利Fluo-8 免洗荧光探针，该探针具有以下显著优势：首先，作为目前高通量筛选（HTS）中最灵敏的钙离子指示剂，Fluo-8 NW能自由穿透细胞膜；其次，进入细胞后，其疏水性保护基团会被非特异性酯酶水解，转化为带负电荷的活性形式并滞留胞内；最重要的是，当与钙离子结合时，其荧光强度可显著增强100-250倍。在实验过程中，当表达特定GPCR的细胞受到化合物刺激时，受体激活会引发细胞内钙离子释放，此时Fluo-8 NW探针能即时捕获这一信号变化，产生显著的荧光增强效应。得益于长波长检测、超高灵敏度等特性，Fluo-8 NW成为细胞钙信号检测的理想工具。

Screen Quest™ Fluo-8 免洗钙检测试剂盒经过专门优化，适用于GPCR和钙通道的功能研究，支持标准96孔或384孔板检测模式，可完美适配自动化操作系统，大幅提升药物筛选效率。其简便的均相检测流程（无需洗涤步骤）和出色的信号稳定性，使其成为高通量药物筛选的理想选择。

样品分析方案

概述

1.使用含1-5%胎牛血清(FBS)的生长培养基培养细胞

2.在生长培养基中制备细胞（ 96孔板：100μL/孔； 384孔板：25μL/孔 ）

3.在室温下孵育1小时

4.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分装为单次使用量，-20°C保存，避免反复冻融

Fluo-8 NW储备液

货号36314：加入20 µL DMSO至Fluo-8 NW(组分A)中混匀

货号36315/36316：加入200 µL DMSO至Fluo-8 NW(组分A)中混匀

注：20 µL储备液可满足一块板需求，未使用的溶液需分装避光保存于-20°C，有效期＞1个月

1X检测缓冲液

a) 货号36314(1板装)和36315(10板装)

将9 mL HHBS(组分C)加入1 mL 10X Pluronic® F127 Plus(组分B)混匀

b) 货号36316(100板装)

将10 mL  10X Pluronic® F127 Plus加入90 mL HHBS缓冲液(试剂盒未包含)混匀

工作液配制

将20 µL Fluo-8 NW储备液加入10 mL 1X检测缓冲液混匀

注：工作液室温下至少稳定2小时

细胞样本制备指南详见：

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

标准实验流程

1.加入染料工作液（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔 ）

注：我们提供两款需去除培养基的钙检测试剂盒(货号36308和36309)

2.细胞培养箱孵育30分钟，转至室温继续孵育30分钟

注意：37°C检测时需立即实验；若细胞耐受性好，可延长室温孵育至1-2小时(建议≤2小时）

3.用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。

注意：实验前必须进行信号测试，建议信号强度调至仪器最大值的10-15%(例如FLIPR-384最大强度65,000时，信号应调至7,000-10,000范围)

试剂应用文献