Screen Quest™ Calbryte 520™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒
货号36317存储条件F/L
规格1 Plate价格2340
Ex (nm)490Em (nm)525
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供最强大的均相荧光测定,用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte -520NW,其可以穿过细胞膜。 Calbryte -520 NW是最适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内,Calbryte -520NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割,导致带电荷的荧光染料停留在细胞内,并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时,该受体表明细胞内钙的释放,这极大地增加了Calbryte -520NW的荧光。其优异的细胞保留特性,高灵敏度和100-250倍的荧光增加(当它与钙形成复合物时)使Calbryte -520NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte -520NW是唯一的钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了最优化的检测方法,用于监测G蛋白偶联受体(GPCR)和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子检测试剂盒。



产品说明书

分析方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte 520 NW染料加载溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意:使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

操作方法 

1.将20μL(Cat#36317)或200μL(Cat#36318和#36319)DMSO加入到Calbryte 520 NW(组分A)的小瓶中并充分混合。

注意:20μLCalbryte 520 NW储备溶液足以用于一个平板。 如果管子密封,可以将未使用的Calbryte 520 NW储备溶液等分并在<-20℃下储存超过一个月。

注意:避光,避免反复冻融循环。

2.将9 mL HHBS(组分C,不包括在试剂盒Cat#36319中)与1 mL 10X Pluronic F127 Plus(10X)(组分B)混合并充分混合。 

实验方案

1.将100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Calbryte 520NW染料加载溶液加入到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟,然后将板在室温下再孵育15-30分钟。

注意:如果测定需要37°C,立即进行实验,无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下运行时间较长,可在室温下孵育细胞板1小时(建议孵育时间不超过2小时。)

3.用HHBS或所需缓冲液制备复合板

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算ATP样品。我们建议使用在线四参数物流计算器。

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体与ATP的荧光信号反应的比较。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/100μL/孔接种过夜,置于96孔黑色壁/透明底板中。 使用Screen Quest Calbryte 520不含Probenecid和WashFree钙测定试剂盒,FLIPR Calcium 4 Assay Kit和Fluo-4 Direct Calcium Assay试剂盒测量钙通量响应。 通过FlexStation 3添加ATP(50μL/孔)以达到最终指示的浓度。

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861--6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581--594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537--542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441--447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593--600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve--mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771--778



说明书
Screen Quest™ Calbryte 520™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒.pdf