Screen Quest™ Calbryte 520™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒
货号36317存储条件F/L
规格1 Plate价格2340
Ex (nm)490Em (nm)525
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的药物发现中的优选方法。 Screen QuestCalbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供最强大的均相荧光测定,用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte-520NW,其可以穿过细胞膜。 Calbryte-520 NW是最适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内,Calbryte-520NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割,导致带电荷的荧光染料停留在细胞内,并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时,该受体表明细胞内钙的释放,这极大地增加了Calbryte -520NW的荧光。其优异的细胞保留特性,高灵敏度和100-250倍的荧光增加(当它与钙形成复合物时)使Calbryte-520NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte-520NW是唯一的钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen QuestCalbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了最优化的检测方法,用于监测G蛋白偶联受体(GPCR)和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化。

 

分析方案

 

概述

 

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte520 NW染料加载溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意:使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

 

配制储备溶液

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

 

1.将20μL(Cat#36317)或200μL(Cat#36318和#36319)DMSO加入到Calbryte520 NW(组分A)的小瓶中并充分混合。

注意:20μLCalbryte520 NW储备溶液足以用于一个平板。 如果管子密封,可以将未使用的Calbryte520 NW储备溶液等分并在<-20℃下储存超过一个月。

注意:避光,避免反复冻融循环。

 

2.将9 mL HHBS(组分C,不包括在试剂盒Cat#36319中)与1 mL 10X Pluronic F127 Plus(10X)(组分B)混合并充分混合。

 

配制工作溶液

Calbryte520 NW染料加载解决方案:

20μLCalbryte520 NW储备溶液加入10 mL分析缓冲液(1X)中并充分混合。

注意:此工作溶液在室温下稳定至少2小时。

注意:10 mL染料加载溶液足以容纳一个96孔板。

 

实验方案

 

1.将100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Calbryte520NW染料加载溶液加入到细胞板中。

 

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟,然后将板在室温下再孵育15-30分钟。

注意:如果测定需要37°C,立即进行实验,无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下运行时间较长,可在室温下孵育细胞板1小时(建议孵育时间不超过2小时。)

 

3.用HHBS或所需缓冲液制备复合板

 

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。



说明书
Screen Quest™ Calbryte 520™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒.pdf