Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

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产品优势  

1. 无需丙磺舒，独特分子结构实现优异细胞滞留性，避免丙磺舒的细胞毒性

2.免洗步骤，简化操作流程

3.结合钙离子后，灵敏度远超传统探针

 

适用范围

用于钙离子检测

 

产品介绍

钙流检测是药物研发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Calbryte-520免丙磺舒免洗钙检测试剂盒提供了一种基于荧光的均相检测方案，可高效检测细胞内钙离子动员。该试剂盒采用我们独有的Calbryte™-520 AM探针——目前高通量筛选（HTS）中最明亮的钙离子指示剂，其脂溶性AM酯形式可有效穿透细胞膜。

Calbryte™-520 AM进入细胞后，其疏水封闭基团被细胞内非特异性酯酶水解，转化为带负电荷的荧光染料并滞留于胞内。当筛选化合物激活GPCR引发钙释放时，探针与钙离子结合可产生100-250倍的荧光增强。这一特性使其成为细胞钙检测的理想工具：不仅具有卓越的细胞滞留性（无需丙磺舒）和超高灵敏度，还能兼容脆弱或难转染细胞系。

Screen Quest™ Calbryte-520免丙磺舒免洗钙检测试剂盒支持96孔或384孔板的自动化操作，为GPCR和钙通道研究提供高效、稳定的标准化解决方案。其免洗设计简化了操作流程，特别适合大规模药物筛选平台。相较于传统方法，Calbryte™-520 AM的优异性能为从基础研究到药物开发提供了更可靠的技术支持。

 

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其他可用仪器
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux

分析方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte 520 AM染料加载溶液（96孔板：100μL/孔；384孔板：25μL/孔）

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意：使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

 

细胞制备

关于细胞样品制备的指南，请访问 https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分装成单次使用的小份并储存在-20 °C。避免反复冻融。

Calbryte™ 520 AM 溶液

向Calbryte™ 520 AM（组分A）的小瓶中加入20 µL（货号#36317）或200 µL（货号#36318和#36319）的DMSO，充分混匀。

注意：1. 20 µL Calbryte™ 520 AM储备液可满足一块培养板的使用需求。未使用的储备液可分装后密封保存于<-20°C，有效期超过一个月。

          2.需避光保存，避免反复冻融。

检测缓冲液（1X）

将9 mL HHBS（组分C，货号#36319试剂盒中未包含）与1 mL 10X Pluronic® F127 Plus（10X）（组分B）混合，充分混匀。

 

工作液配制

Calbryte™ 520 AM染料工作液

将20 µL Calbryte™ 520 AM储备液加入10 mL检测缓冲液（1X）中，充分混匀。

注意：1. 该工作液在室温下可稳定保存至少2小时。

          2. 10 mL染料加载液可满足一块96孔板的使用需求

 

实验操作步骤

1.向细胞培养板每孔加入100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）Calbryte™ 520 AM染料工作液

2.将染料加载后的培养板置于细胞培养箱中孵育30-60分钟，随后在室温下继续孵育15-30分钟。

注：若实验需在37°C下进行，孵育后应立即开始检测，无需室温孵育。若细胞在室温下可保持良好活性，可延长室温孵育时间至1小时（建议总孵育时间不超过2小时）。

注意：染料加载后切勿洗涤细胞。

3.使用HHBS或自选缓冲液配制化合物板。

4.通过监测荧光强度（激发/发射波长=490/525 nm）进行钙流检测。