Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒
| Ex (nm) | 336 | Em (nm) | 505 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
钙流检测法是药物研发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。本比率法钙检测试剂盒可均相检测由G蛋白偶联受体或钙通道激活引发的细胞内钙离子浓度变化。表达目标GPCR且通过钙信号传导的细胞需预先加载可穿透细胞膜的Fura-2 AM探针。该探针进入细胞后，其疏水性封闭基团会被酯酶水解，形成带负电荷的荧光染料滞留胞内，其荧光波长在与钙结合后会发生蓝移。当细胞受到激动剂刺激时，受体信号触发细胞内钙释放，使Fura-2在短波长处的荧光强度显著增强。
相较于单波长探针Fluo-4，Fura-2的比率特性使本试剂盒能更精准测定细胞内钙离子浓度。该检测方案只需单次加样操作简便，特别适合高通量检测环境，可采用标准96孔或384孔微孔板模式，并能轻松实现自动化检测。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 340/380 nm |
| Em： | 510 nm |
| Cutoff： | 470 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取/分液处理 |
| 其他可用仪器 | |
| FDSS、FLIPR、FlexStation |
样品实验方案
简要概述
1.在生长培养基中准备细胞
2.添加Fura-2 AM染料加载溶液（96孔板：100 µL /孔；384孔板：25 µL /孔）
3.在室温下孵育1-2小时
4.在Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处检测荧光强度
细胞制备
细胞本制备指南请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
储备溶液配制
除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融。
Fura-2 AM储备溶液
1.向Fura-2 AM（组分A）瓶中加入200 µL DMSO，充分混匀。
注意：20 µL Fura-2 AM储备溶液可满足一块板。未使用的溶液可分装密封避光保存于<-20°C，有效期超过1个月，避免反复冻融。
检测缓冲液（1X）
a）对于＃36320（10板试剂盒），将9 mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic® F127 Plus（1 mL，组分B），混匀。
b）对于＃36321（100个板试剂盒），将90 mL HHBS（需自备）加入10X Pluronic® F127 Plus（10 mL，组分B），混匀。
注意：10 mL 1X分析缓冲液可满足一块板的需求。 分未使用的缓冲液需分装避光保存于<-20°C，避免反复冻融。
工作溶液配制
Fura-2 AM染料工资溶液
将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。
注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1向细胞板每孔加入100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）Fura-2 AM染料工作溶液。
注意：若待测化合物与血清存在干扰，需用HHBS缓冲液替换生长培养基。
2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育20分钟。
注意：若需在37°C下检测，孵育后应立即进行实验，无需室温静置。
3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。
注意：1.实验前需进行信号测试，不同仪器的检测强度范围各异。
2.对于在FDSS上进行的测定，需选择仪器预设的Fura-2钙检测专用滤光片。
试剂应用文献
Investigation of the Effects of Blocking Potassium Channels With 4-Aminopyridine on Paclitaxel Activity in Breast Cancer Cell Lines
Authors: C{\"u}ce-Aydo{\u{g}}mu{\c{s}}, Esra M and {\.I}nhan-Garip, G Ay{\c{s}}e
Journal: Cancer Reports (2024): e70072
