Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒
| Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 528 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
均相检测设计，免洗步骤，简化操作流程
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
钙流检测是药物研发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Fluo-4免洗钙检测试剂盒提供了一种荧光的均相检测方案，可高效检测细胞内钙离子动员。该试剂盒采用Fluo-4 AM探针，其脂溶性AM酯形式能够有效穿透细胞膜。
Fluo-4 AM进入细胞后，其疏水封闭基团被细胞内非特异性酯酶水解，转化为带负电荷的Fluo-4染料并滞留于胞内。当筛选化合物激活GPCR引发钙释放时，探针与钙离子结合可产生显著的荧光增强。这一特性使其成为监测GPCR和钙通道活动的理想工具。
Screen Quest™ Fluo-4免洗钙检测试剂盒支持96孔或384孔板的自动化操作，其免洗设计简化了实验流程，特别适合大规模药物筛选平台。该优化方案为从基础研究到药物开发提供了可靠、高效的技术支持。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 520 nm |
| Cutoff： | 510 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取/分液处理 |
| 其他可用仪器 | |
| ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux |
样品实验方案
简要概述
1.在生长培养基中准备细胞
2.添加Fluo-4 AM染料加载溶液（96孔板：100 µL /孔；384孔板：25 µL /孔）
3.在37°C孵育1小时
4.在Ex / Em = 490/525 nm下检测荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份并储存在-20 °C。避免反复冻融。
Fluo-4 AM储备溶液
向 Fluo-4 AM（成分 A）的小瓶中加入 200 µL DMSO，充分混匀。
注意：20 µL Fluo-4 NW储备液可满足一块板。 将未使用的Fluo-4 AM储备溶液等分，并在<-20℃下保存1个月以上避光保存，避免反复冻融。
分析缓冲液（1X）
取9 mL HHBS缓冲液（Component C）加入1 mL 10X Pluronic® F127 Plus（Component B），充分混匀。
注意：10 mL 1X分析缓冲液可满足一块板。 分装并未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）在<-20℃下避光存储。避免反复冻融。
工作溶液配制
Fluo-4 AM工作溶液
取20 µL Fluo-4 NW储备溶液加入10 mL 1X Assay Buffer中混匀，该工作液在室温下至少可稳定保存2小时。
细胞样本制备指南请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
实验步骤
1向细胞板每孔加入Fluo-4 AM染料工作液（96孔板每孔100 µL，384孔板每孔25 µL）。
2.将染料加载板置于细胞培养箱中孵育1小时，随后室温继续孵育15-30分钟。
注意：若实验需在37℃条件下进行，则无需室温孵育步骤，应立即开始检测。
3.使用HHBS缓冲液或目标缓冲液配制化合物板。
4.通过监测荧光强度（激发/发射波长=490/525 nm）进行钙流实验检测。
