Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒

货号36326存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格100 Plates价格38292
Ex (nm)495Em (nm)528
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体(GPCR)药物发现的首选方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道激活引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fluo-4 AM预加载,Fluo-4 AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内,Fluo-4 AM的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解,从而导致带负电荷的Fluo-4染料留在细胞内,并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时,受体信号释放细胞内钙,这大大增加了Fluo-4的荧光。此Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒提供了一种优化的测定方法,用于监测G蛋白偶联受体(GPCR)和钙通道。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行,并易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式
其他可用仪器:
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Fluo-4 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fluo-4 AM储备溶液:将200 µL DMSO加到Fluo-4 AM(组分A)的小瓶中,并充分混合。 注意:20 µL Fluo-4 NW储备液足以装满一块板。 如果将试管紧密密封,可以将未使用的Fluo-4 AM储备溶液等分,并在<-20℃下保存1个月以上。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):将1 mL的10XPluronic®F127 Plus(10 mL,组分B)加入9 mL的HHBS缓冲液(组分C)中,制成1X的测定缓冲液,并充分混合。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus(组分B)。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fluo-4 AM上染溶液:将20 µL Fluo-4 NW储备溶液添加到10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。 该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Fluo-4 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度运行钙通量测定法。

 

图示

图1.使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒,将细胞与100 µL染料加载溶液一起在室温下孵育1小时。 通过Flexstation 3(MDC)添加ATP(50µL /孔),以达到最终指示的浓度。

 

 

参考文献

Lysophosphatidylcholine and its phosphorothioate analogues potentiate insulin secretion via GPR40 (FFAR1), GPR55 and GPR119 receptors in a different manner
Authors: Drzazga, Anna and Kristinsson, Hjalti and Salaga, Maciej and Zatorski, Hubert and Koziolkiewicz, Maria and Gendaszewska-Darmach, Edyta and Bergsten, Peter
Journal: Molecular and Cellular Endocrinology (2017)



说明书
Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 .pdf