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Amplite 乙醇定量试剂盒

英文名称:Amplite® Ethanol Quantitation Kit
产品参数
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 乙醇定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于乙醇检测的试剂盒,在生命科学研究,临床评估以及食品和药物工业中,非常需要快速进行乙醇定量测量的能力。 该非放射性乙醇测定基于醇氧化酶对乙醇的氧化。 该试剂盒使用我们的Amplite Red,使该套件可以双模式记录,荧光测量还是比色读数。 该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。 该测定是稳定的,灵敏的,并且可以容易地适用于需要测量乙醇的各种应用中的高通量测定。 该测定可在30分钟内完成。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 乙醇定量试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器


吸光度酶标仪  
推荐孔板: 透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

准备乙醇工作溶液(50μL)
添加乙醇标准品或测试样品(50μL)
在室温下孵育5-30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(截止= 570 nm)

 

溶液制备

1.储备溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1Amplite 乙醇试剂原液(250X):
将40μLDMSO(组分D)加入到Amplite 乙醇试剂(组分A)的小瓶中以制备250X Amplite 乙醇试剂储备溶液。 应立即使用原液。 注意:Amplite 乙醇试剂在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯基乙醇存在下不稳定。 反应中DTT或2-巯基乙醇的浓度应不高于10μM。 Amplite 乙醇试剂在高pH(> 8.5)下也不稳定。 因此,反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液(pH 7.4)。

1.2乙醇酶混合物(100X):
将100μL测定缓冲液(组分B)加入到乙醇酶混合物(组分C)的小瓶中并充分混合以制备100X乙醇酶混合物。

 

2.标准溶液配制

2.1乙醇标准溶液配制
通过将适量的100%乙醇标准品(组分E)稀释到H 2 O中来制备乙醇标准品,以产生0%至0.1%的乙醇浓度。 包含0%乙醇对照作为空白对照。 乙醇浓度应低两倍(即0%至0.05%)。

 

3.工作溶液配制

将20μL250XAmplite 乙醇试剂储备溶液和50μL100X乙醇酶混合物加入5mL分析缓冲液(组分B)中以制备乙醇工作溶液。

 

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中乙醇标准品和测试样品的布局。

ES =乙醇标准品(ES1-ES7,0.0001%至0.1%),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
ES1 ES1 ... ...
ES2 ES2 ... ...
ES3 ES3    
ES4 ES4    
ES5 ES5    
ES6 ES3    
ES7 ES7    

表2.每个孔的试剂组成

规格 试剂
ES1-ES7 50ul 连续稀释液(0.0001%至0.1%)
BL 50ul
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备乙醇标准品(ES),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。注意:高浓度的乙醇(例如0.5%终浓度)可能会由于Amplite 乙醇试剂的过度氧化(导致非荧光产物)而导致荧光信号降低。

2.向乙醇标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL乙醇工作溶液,使总乙醇测定体积为100μL/孔。对于384孔板,在每个孔中加入25μL乙醇工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm,发射= 590-600nm(Ex / Em = 540 / 590nm),截止= 570nm监测荧光强度。注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算EtOH样品。 点击使用在线线性回归计算器

 

图1.使用Gemini荧光酶标仪(Molecular Devices),在固体黑色96孔板上用Amplite 乙醇定量试剂盒测量乙醇剂量响应。

 

试剂应用文献

Novel Role of Ethanol in Delaying Postharvest Physiological Deterioration and Keeping Quality in Cassava
Authors: Liu, Guoyin and Li, Bing and Wang, Yuqi and Wei, Bo and He, Chaozu and Liu, Debing and Shi, Haitao
Journal: Food and Bioprocess Technology (2019): 1--10
 
TAT-surface modified acyclovir-loaded albumin nanoparticles as a novel ocular drug delivery system
Authors: Suwannoi, Panita and Chomnawang, Mullika and Tunsirikongkon, Amolnat and Phongphisutthinan, Angsuma and Müller-Goymann, Christel C and Sarisuta, Narong
Journal: Journal of Drug Delivery Science and Technology (2019)
 
Development of Acyclovir-Loaded Albumin Nanoparticles and Improvement of Acyclovir Permeation Across Human Corneal Epithelial T Cells
Authors: Suwannoi, Panita and Chomnawang, Mullika and Sarisuta, Narong and Reichl, Stephan and Müller-Goymann, Christel C
Journal: Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics (2017)
 
Development of acyclovir-loaded albumin nanoparticles and improvement of acyclovir permeation across human corneal epithelial T cells
Authors: Suwannoi, Panita and Chomnawang, Mullika and Sarisuta, Narong and Reichl, Stephan and M{\"u}ller-Goymann, Christel C
Journal: Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics (2017): 743--752
 
Enhancement of the antioxidant and starch hydrolase inhibitory activities of king coconut water (Cocos nucifera var. aurantiaca) by fermentation with kombucha 'tea fungus'
Authors: Watawana, Mindani I and Jayawardena, Nilakshi and Gunawardhana, Chaminie B and Waisundara, Viduranga Y
Journal: International Journal of Food Science & Technology (2016): 490--498
 
On the dynamics of kefir volatome
Authors: Hu, Jie-Bi and Gunathilake, Sampath and Chen, Yu-Chie and Urban, Pawel L
Journal: RSC Advances (2014): 28865--28870
 
pH-Responsive nanoparticle vaccines for dual-delivery of antigens and immunostimulatory oligonucleotides
Authors: Wilson, John T and Keller, Salka and Manganiello, Matthew J and Cheng, Connie and Lee, Chen-Chang and Opara, Chinonso and Convertine, Anthony and Stayton, Patrick S
Journal: ACS nano (2013): 3912--3925

参考文献

Prevalence of ethanol consumption may be higher in women than men in a university health service population as determined by a biochemical marker: whole blood-associated acetaldehyde above the 99th percentile for teetotalers
Authors: Peterson KP, Bowers C, Peterson CM.
Journal: J Addict Dis (1998): 13
 
Quantifying ethanol by high performance liquid chromatography with precolumn enzymatic conversion and derivatization with fluorimetric detection
Authors: Chen HM, Peterson CM.
Journal: Alcohol (1994): 577
 
Enzymatic determination of ethanol in saliva by flow injection analysis
Authors: Linares P, Ruz J, De Castro MD, Valcarcel M.
Journal: J Pharm Biomed Anal (1987): 701

 

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产品名称 货号
Amplite 胆固醇定量试剂盒 Cat#40006
Amplite 胆碱定量试剂盒 Cat#40007