Amplite 荧光法葡萄糖定量试剂盒

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产品优势

1.稳定可靠，可轻松适配高通量检测

2.适用性广泛，可满足多种葡萄糖检测需求

 

适用范围

用于葡萄糖定量检测

 

产品介绍

葡萄糖作为生物学中最关键的单糖，既是细胞生长的能量来源和代谢中间体，又是光合作用的主要产物，能在原核和真核生物中启动细胞呼吸过程。其浓度水平是多种代谢疾病的重要诊断指标。

Amplite 荧光法葡萄糖定量试剂盒提供了一种快速、灵敏的检测方法，适用于血清、血浆、体液、食品及培养液等多种生物样本。试剂盒采用Amplite®Red底物，支持荧光和比色双模式检测，并提供所有必需组分及优化方案。该检测方法稳定可靠，可轻松适配高通量检测，适用于发酵过程监控、蛋白表达中的葡萄糖补料控制以及葡萄糖转运体活性监测等多种应用场景。

 

样品实验方案

简要概述

准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品（50μL）
准备并添加葡萄糖分析工作溶液（50μL）
在37°C孵育10-30分钟
在Ex / Em = 540 / 590nm处检测荧光强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融。
1.1Amplite 红色储备液（250X）：
将100μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融。

注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液（pH 7.4）。

1.2辣根过氧化物酶（HRP）储备液（10 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖氧化酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性等分试样并储存在-20℃。

1.4葡萄糖原液（800mM）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

注意：未使用的葡萄糖溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

2.标准溶液配制

2.1葡萄糖标准溶液配制
通过将适量的800mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液（组分B）中来制备葡萄糖标准品，以产生30μM的葡萄糖浓度。 然后在测定缓冲液（组分B）中进行1：3连续稀释，得到约10,3,1,0.3,0.1和0.03μM连续稀释的葡萄糖标准品。 包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。

 

3.工作溶液配制

表1.一个透明底96孔微孔板的分析工作溶液（2X）

组分	容积
Amplite 红色储备液（250x）	20ul
HRP储备液（10 U / mL）	100ul
葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）	100ul
分析缓冲液	4.78ml
总容积	5ml

 

操作步骤

表2.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖标准品和测试样品的布局。

GS =葡萄糖标准品（GS1-GS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

 

BL	BL	TS	TS
GS1	GS1	...	...
GS2	GS2	...	...
GS3	GS3
GS4	GS4
GS5	GS5
GS6	GS6
GS7	GS7

 

表3.每个孔的试剂组成

葡萄糖标准溶液	空白对照	测试样品
连续稀释：50μL	测定缓冲液（化合物B）：50μL	50ul

注意：由于Amplite 红色底物（对非荧光产物）的过氧化，高浓度的葡萄糖（例如测试样品或标准品中的100μM）可能导致荧光信号减少。

 

葡萄糖测定

1.如表2和3中所述，将葡萄糖标准品和含葡萄糖的测试样品加入96孔黑色微孔板中。

2.将50μL葡萄糖测定工作溶液添加到葡萄糖标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（表2），以使总葡萄糖测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.将反应在37℃孵育10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（Ex / Em = 540 / 590nm）监测荧光强度。