Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒(荧光法)绿色荧光

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产品优势

1.高灵敏度：可检测低至 10 pmol 的马来酰亚胺（100 µL 体系，100 nM） 

2. 一步法操作：简化流程，省时省力，兼容 96/384 孔板，适配自动化系统

 

适用范围

用于马来酰亚胺定量

 

产品介绍

目前市面上已有多种带有马来酰亚胺基团的交联剂，广泛应用于蛋白质-蛋白质或蛋白质-其他生物分子的交联反应。然而针对第一蛋白中马来酰亚胺基团定量检测的试剂或检测盒却寥寥无几，且现有商业产品均存在操作流程繁琐的问题

Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒(荧光法)绿色荧光采用专利荧光染料技术，该染料与马来酰亚胺基团反应后荧光显著增强。通过灵敏的一步式荧光检测法，在100 µL检测体系中可检测低至10pmol （浓度100 nM）的马来酰亚胺基团。本产品具有检测快速、结果稳定等特点，支持96孔或384孔微孔板检测模式，并可轻松实现自动化操作。检测盒提供完整试剂组及便捷的操作方案。

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样品实验方案

简要概述

1.准备20X马来酰亚胺反应混合物（260μL）

2.在室温下孵育30-60分钟

3.准备N-乙基马来酰亚胺标准品或待测样品（50 µL）

4.加入马来酰亚胺工作液（50 µL）

5.在室温下孵育5至30分钟

6.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度（截止= 515 nm）

 

储备溶液配制

未使用的储备液应分装后-20°C 保存，避免反复冻融。

1. Maleimide Green™ 储备液（500X）

向 Maleimide Green™（组分 A） 的小瓶中加入 20 µL DMSO（组分 E），配制成 500X 储备液。

注意：10 µL 500X Maleimide Green™ 储备液 可满足 1 块 96 孔板 的实验需求。

 

2.标准品配制

推荐使用 AAT Bioquest 在线稀释计算工具https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/5523 

N-乙基马来酰亚胺标准品（100 µM 至 10 µM 梯度稀释）

2.1. 取 10 µL 10 mM（10 nmol/µL）N-乙基马来酰亚胺标准品（组分 D），加入 990 µL 检测缓冲液（组分 C），得到 100 µM（100 pmol/µL） 标准溶液。

2.2. 将 100 µM 标准溶液 稀释至 10 µM（MS7）。

2.3. 以 1:2 比例 进行连续稀释，得到 MS6-MS1 系列标准品（使用 检测缓冲液（组分 C） 稀释）。

 

 

3.工作液配制

3.1 取 10 µL 500X Maleimide Green™ 储备液，加入 250 µL 反应缓冲液（组分 B），混匀后配制成 20X 马来酰亚胺反应混合液。

3.2 避光、室温孵育至少 30 分钟。

注意：1.加入 500X Maleimide Green™ 储备液 后，溶液应呈黄色。

           2.孵育时间 ≥30 分钟 对提高检测灵敏度至关重要。

          3.将整瓶 20X 马来酰亚胺反应混合液 加入 5 mL 检测缓冲液（组分 C），混匀后配制成 马来酰亚胺工作液。马来酰亚胺工作液需现配现用，1 小时内使用完毕

 

操作步骤

 

表1.实心黑色96孔微孔板中N-乙基马来酰亚胺标准品和测试样品的布局

MS = N-乙基马来酰亚胺标准品（MS1-MS7,0.14至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
MS1	MS1	...	...
MS2	MS2	...	...
MS3	MS3
MS4	MS4
MS5	MS5
MS6	MS6
MS7	MS7

 

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50 µL	连续稀释液（0.156 至 10 µM）
BL	50 µL	分析缓冲液
TS	50 µL	测试样品

 

1.根据表1和2中提供的布局，依次加入：N-乙基马来酰亚胺标准品（MS）、空白对照（BL）、待测样品（TS）

96孔板：每孔加样50 µL；384孔板：每孔加样25 µL

2.向各孔（标准品/空白/样品）中加入：96孔板：50 µL 马来酰亚胺工作液 → 终体积100 µL/孔；384孔板：25 µL 马来酰亚胺工作液 → 终体积50 µL/孔

3.室温避光孵育5-30分钟

注意：荧光背景会随时间升高，建议30分钟内完成检测以确保最合适数据质量

4. 使用酶标仪检测荧光强度（激发/发射波长=490/525 nm，截止波长=515 nm）