Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒 比色法

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适用范围

用于马来酰亚胺定量

 

产品介绍

马来酰亚胺（Maleimide）基团虽然可以通过302 nm处的紫外分光光度法直接检测，但由于其摩尔消光系数较低（仅620 M-1cm-1），导致该方法灵敏度不足。此外，蛋白质在该波长下的背景吸收会进一步干扰检测结果。

Amplite 马来酰亚胺定量试剂盒采用了一种更精准的定量策略：首先使样品与过量硫醇（thiol）充分反应，随后利用4,4'-DTDP（摩尔消光系数高达19,800 M-1cm-1）检测未反应的剩余硫醇。通过计算初始硫醇总量与反应后剩余硫醇量的差值，即可准确推算出样品中马来酰亚胺基团的含量。该技术本质上是一种反向谷胱甘肽（GSH）检测法，其原理基于GSH的巯基与马来酰亚胺基团可形成稳定的硫代琥珀酰亚胺键。待样品反应完全后，通过4,4'-DTDP定量反应体系中剩余的GSH巯基，即可通过消耗的GSH量换算出马来酰亚胺含量。

需要更高检测灵敏度的用户，我们推荐选用荧光法检测试剂盒（产品编号#5523），该产品具有更优异的检测灵敏度。

 

样品实验方案

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液均应分装成单次使用量，制备后储存于-20°C。避免反复冻融。

MEA储备液（500X）

向MEA（组分A）的小瓶中加入200 µL蒸馏水。

注意：

1. 10 µL 500X MEA储备液可进行50次反应（每次反应0.5 mL）

2. 未使用的500X MEA储备液应分装后避光保存于-20°C

 

4,4'-DTDP储备溶液（50X）：

向4,4'-DTDP（组分B）的小瓶中加入1 mL DMSO（组分D），充分混匀。

注意：

1. 100 µL 50X 4,4'-DTDP储备液可进行10次反应（每次反应0.5 mL）

2. 未使用的50X 4,4'-DTDP储备液应分装后避光保存于-20°C

 

工作液配制

MEA工作液

取10 µL MEA储备液（500X）加入5 mL蒸馏水中，充分混匀。

注意：MEA工作液不稳定，建议使用前新鲜配制

 

实验操作流程

（以下为比色皿检测推荐方案）

1.设置3个总巯基管：每管加入400 µL检测缓冲液（组分C）和100 µL MEA工作液，室温孵育20分钟

2.为每个样品设置3个测试管：每管加入0.05 mg测试样品，并用检测缓冲液（组分C）补足至400 µL，加入100 µL MEA工作液，室温孵育20分钟。

3.以检测缓冲液（组分C）为空白对照，测定324 nm处吸光度

4.在孵育过程中进行总巯基测定：向每个总巯基管加入10 µL 50X 4,4'-DTDP储备液，室温孵育2分钟

注意：此时不要向样品管加入4,4'-DTDP储备液

5.直接测定3个总巯基管在324 nm处的吸光度（无需清洗比色皿），记录读数并计算平均值（"ODTSH"）

6.清洗比色皿后，测定第一个样品管（步骤2）在加入4,4'-DTDP前的324 nm吸光度（OD0）

7.向样品比色皿中加入10 µL 50X 4,4'-DTDP储备液，混匀，室温孵育2分钟，测定324 nm处吸光度（OD），清洗比色皿后重复步骤6-7完成剩余样品测定，记录所有读数

 

试剂应用文献

Polysaccharide-conjugate vaccines for Burkholderia pseudomallei based on the O-antigens of serotypes A and B.
Authors: Yan, Jingmin and Huang, Jinzhu and Lu, Xiaoxue and He, Xiaoyi and Rao, Chenglong and Nan, Dongqi and Lu, Haiyang and Guo, Linming and Li, Qian and Wang, Shiwei and others,
Journal: Carbohydrate Polymer Technologies and Applications (2025): 100859