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Amplite 比色法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒

英文名称:Amplite® Colorimetric Beta-Hydroxybutyrate (Ketone Body) Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量N/A溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 比色法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测羟基丁酸的试剂盒,酮体由肝脏产生,并在血糖水平下降时用作外周能量源。两种主要的酮体是β-羟基丁酸酯(β-HB)和乙酰乙酸酯(AcAc),而丙酮是第三种丰富的酮体。通常这两种主要的酮体在禁食期间(低食量摄入)和长时间运动期间少量存在于血液中。在患有糖尿病,酒精或水杨酸盐中毒,缺乏症,儿童低血糖症和其他急性疾病状态的患者中,在血液中发现大量酮体。酮体在血液中的过量生成和积聚(酮病)可导致病理性代谢性酸中毒(酮症酸中毒)。在极端情况下,酮症酸中毒可能是致命的。量化血液中主要酮体β-HB(约75%)的血酮测试方法已用于诊断和监测酮症酸中毒的。 Amplite 比色法β-羟基丁酸酯检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法,用于测量生物样品中的β-HB水平。该测定基于β-HB的酶偶联反应,其中产物NADH可以通过荧光NADH传感器特别监测。荧光信号可以通过具有在570nm至610nm的波长处的OD比率的吸光度酶标仪来测量。使用此比色法β-羟基丁酸酯测定试剂盒,我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的β-HB。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 570/610nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备β-HB工作溶液(50 µL)
2.添加β-HB标准品或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.OD比为570/610 nm时监测吸光度的增加

 

溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NAD储备溶液(100X):
将100 µL H2O加入NAD小瓶(组分C)中,制成100X NAD储备溶液。

1.2 β-HB标准溶液(100 mM):
将1 mL H2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液(组分D)中,制成100 mMβ-HB标准溶液。

 

2.标准溶液

β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液,以生成1000 µMβ-HB标准溶液(HB7)。 取1000 µMβ-HB标准溶液(HB7),并在PBS中进行1:3系列稀释,以得到系列稀释的β-HB标准溶液(HB6-HB1)。 注意:稀释的β-HB标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶混合物(组分A)中。

3.2 将50 µL 100X NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中,并充分混合以制成β-HB工作溶液(组分A + B + C)。 注意:此β-HB工作溶液不稳定,请立即使用,并避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准(HB1-HB7,1至1000 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
HB1 HB1 ... ...
HB2 HB2 ... ...
HB3 HB3    
HB4 HB4    
HB5 HB5    
HB6 HB6    
HB7 HB7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
HB1-HB7 50ul 连续稀释(1至1000 µM)
BL 50ul 1X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,准备β-HB标准液(HB),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,以使总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应10-30分钟。

4.用吸光度板读数器以OD比570/610 nm监测吸光度的增加。

 

参考文献

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产品名称 货号
Amplite 荧光法β-羟基丁酸(酮体)检测试剂盒 Cat#13831