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Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*

英文名称:Amplite® Colorimetric Calcium Quantitation Kit *Blue Color*
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂盒,钙对所有生物体都是必不可少的,特别是在细胞生理学中,钙离子Ca2+进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素,它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使,也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张,神经冲动传递,肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围(9至10.5mg / dL)内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭,维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。 Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理溶液中检测钙的简单方法。该试剂盒使用我们的Calcium Blue 作为显色钙指示剂。其吸光度随钙结合而变化。 Calcium Blue 在中性pH范围内紧密结合钙,产生钙蓝色 - 钙复合物,在~650 nm处具有强烈的吸收。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法钙离子定量试剂盒。 

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 600 or 650nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

准备测试样品和钙标准溶液(50μL)
添加Calcium Blue 试剂(50μL)
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
钙标准溶液(3 mM):
将10μL标准钙(300mM)(组分C)加入到990μL稀释缓冲液(组分B)中以得到钙标准溶液(3mM)并充分混合。

 

2.钙标准溶液配制

 

操作步骤

 

表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准(CS1-CS7); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
CS1 CS1 ... ...
CS2 CS2 ... ...
CS3 CS3    
CS4 CS4    
CS5 CS5    
CS6 CS6    
CS7 CS7    

 

表2.每个孔的试剂组成

钙标准 空白对照 测试样本
连续稀释:50μL 稀释缓冲液(化合物B):50μL 50 µL

 

钙测定

将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中,一式两份。

向钙标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue (组分A),使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

在室温下孵育反应5至10分钟,避光。

用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

 

血清或尿液样本的分析方案

表3.每个孔的试剂组成

钙标准 空白对照 血清或尿液
连续稀释液:10μL 稀释缓冲液(化合物B):10μL 10 µL

 

钙测定

1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。

2.向钙标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™(组分A),使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.在室温下孵育反应5至10分钟,避光。

4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(吸光度)用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算钙样品。 

图1.使用Amplite 比色钙定量试剂盒在96孔黑色/透明底板上测量钙剂量响应。 在5分钟的孵育时间内检测到低至~2.5μM的Ca2+(n = 3)

 

参考文献

High efficiency single-step biomaterial-based microparticle fabrication via template-directed supramolecular coordination chemistry
Authors: Kwok Kei Lai, Reinhard Renneberg, Wing Cheung Mak
Journal: Green Chemistry (2016): 1715--1723

Microcystin-LR causes sexual hormone disturbance in male rat by targeting gonadotropin-releasing hormone neurons
Authors: Xueting Wang, Jie Ding, Zou Xiang, Peipei Jiang, Jing Du, Xiaodong Han
Journal: Toxicon (2016): 45--55

 

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