Amplite 荧光法内毒素检测试剂盒
Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
分子量 | - | 溶剂 | - |
存储条件 | - |
脂多糖( LPS ),也称为内毒素,是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS是脊椎动物先天免疫系统的强力刺激剂,可引起发烧、感染性休克和最终死亡。它也被认为是检测细菌病原体入侵的生物标志物,并在极端情况下负责炎症反应和内毒素休克的发展。在生物材料,如蛋白质、多肽或抗体样品中检测LPS是生物制造和生物加工的一项重要任务。Amplite 荧光内毒素检测试剂盒使用Endotoxin Green,一种敏感的荧光底物。Endotoxin Green在内毒素和鲎血细胞提取物( LAL )的存在下水解。Endotoxin Green的水解产物产生强烈的绿色荧光。内毒素活性与Endotoxin Green水解产生的荧光强度成正比。Amplite 荧光内毒素检测试剂盒可检测广泛的内毒素(从1 EU / ml到0.001 EU / ml)。它是非常敏感的,可以在30分钟内检测到低至0.001 EU / mL的内毒素。
适用仪器
荧光酶标仪 | |
Ex: | 490nm |
Em: | 525nm |
Cutoff: | 515nm |
推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
读取模式: | 底读 |
样品分析方案
概述
制备Endotoxin Green工作溶液
添加大肠杆菌内毒素标准品和测试样品(25µL)
添加鲎溶血酶溶液(25µL)
在37°C下孵育30分钟
准备并添加Endotoxin Green工作溶液(50µL)
在10分钟内读取Ex/Em=490/525 nm时的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1.Endotoxin Green储备液
将50µL DMSO添加到Endotoxin Green小瓶中(成分A)制成100X Endotoxin Green储备溶液。
2. 5X LAL细胞裂解液储备液
将500µL无内毒素水(组分B)加入鲎细胞裂解液(组分C)小瓶中,制成5X鲎细胞溶解液溶液。
标准溶液配制
为方便起见,请使用串行稀释计划器:https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/
E、 大肠杆菌内毒素标准溶液
将10µL 100 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液添加到990µL无内毒素水(组分B)中,生成1 EU/mL的大肠杆菌内毒素溶液(ES1)。然后取1 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液(ES1),在无内毒素水(B组分)中进行1:3的连续稀释,得到连续稀释的大肠杆菌内毒素(ES2-ES7)。
工作溶液配制
1. Endotoxin Green工作溶液
添加50µLEndotoxin Green将储备溶液溶于5mL无内毒素水(组分B)中,使总体积为5.05mL Endotoxin Green工作溶液。
2. LAL工作溶液
将500µL鲎细胞裂解液(LAL)储备溶液添加到2 mL无内毒素水(组分B)中,使总体积为2.5 mL鲎细胞溶解液(LAL)工作溶液。
注:根据需要和使用前准备LAL工作溶液的量。使用无内毒素瓶或试管。
操作步骤
表1.大肠杆菌内毒素标准品和测试样品在透明底部96孔微孔板中的布局。ES=E。大肠杆菌内毒素标准(ES1-ES7,1.00至0.001 EU/mL);BL=空白对照;TS=试样
BL | BL | TS | TS |
ES1 | ES1 | ... | ... |
ES2 | ES2 | ... | ... |
ES3 | ES3 | ||
ES4 | ES4 | ||
ES5 | ES5 | ||
ES6 | ES6 | ||
ES7 | ES7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 溶液体积 | 使用试剂 |
ES1-ES7 | 25ul | 连续稀释(1至0.001 EU/mL) |
BL | 25ul | 无内毒素水 |
TS | 25ul | 测试样品 |
1.根据表1和表2中提供的布局,制备大肠杆菌内毒素标准品(ES)、空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每个孔使用12.5µL试剂,而不是25µL。
2.向大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品的每个孔中加入25µL 2X鲎鲎裂解液。
3.充分混合并在37°C下孵育30分钟。
4.添加50µL Endotoxin Green将工作溶液添加到大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品的每个孔中,使总分析体积为100µL/孔。对于384孔板,添加25µL Amplite Endotoxin Green将工作溶液注入每个孔,总体积为50µL/孔。
5.检测Ex/Em=490/525nm,Cutoff:515nm的荧光强度。
注:为获得良好结果,在添加工作溶液后2至10分钟内读取。 注:可加入25µL 25%乙酸以停止反应。
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