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Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒

英文名称:Amplite® Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD) Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖的试剂盒,葡萄糖-6 - 磷酸脱氢酶( G6PD)催化葡萄糖-6 - 磷酸转化为6 - phosphoglucono -δ-内酯,所述和限速步骤中戊糖磷酸途径。这是至关重要的代谢途径,它提供通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)的水平降低了能量的细胞(如红细胞),以及用于生产戊糖。 NADPH的生产是非常重要的用于脂肪酸和/或类异戊二烯,如肝,乳腺,脂肪组织,和肾上腺生物合成的组织。该NADPH还保持谷胱甘肽在这些细胞的水平,有助于保护红血细胞免受氧化损伤。G6PD缺乏易患个人非免疫性溶血性贫血。 AAT Bioquest的Amplite 荧光葡萄糖-6 - 磷酸脱氢酶检测试剂盒提供了用于生物样品如血清,血浆,尿液,以及细胞培养样品中检测G6PD缺乏一种简单,灵敏,快速基于荧光的方法。在酶偶联测定法,比例是专门由一个荧光NADPH的传感器监测,以得到高的红色荧光产物的浓度。荧光信号可在EX/ EM = 540 nm/590 nm处读取荧光酶标仪。与G6PD检测试剂盒,我们能够探测到小至 1 mU/ml G6PD在100 μL的反应体积。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
Cutoff: 570nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备G6PD工作溶液(50 µL)
2.添加G6PD标准品或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液(100X):
在NADP小瓶(组分C)中加入100 µL H2O,制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6PD标准溶液(100 U / mL):
将100 µL H2O或1X PBS缓冲液加到G6PD Standard(组分D)的小瓶中,制成100 U / mL G6PD标准溶液。

 

2.标准溶液

G6PD标准
将10 µL G6PD标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中,以生成1000 mU / mL G6PD标准溶液。 将15 µL的1000 mU / mL G6PD标准溶液加入到485 uL的1X PBS缓冲液中以生成30 mU / mL的G6PD(G6PD7),然后进行1:3的系列稀释以获得G6PD标准品的系列稀释(G6PD6- G6PD1)。 注意:稀释的G6PD标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶探针(组分A)中。 将50 µL NADP储备溶液(100X)加入组分A的瓶子中,并充分混合。 注意:此G6PD分析工作溶液足以用于一个96孔板。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G6PD标准品和测试样品的布局。 G6PD = D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标准品(G6PD1- G6PD7,0.04至30 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品

BL BL TS TS
G6PD1 G6PD1 ... ...
G6PD2 G6PD2 ... ...
G6PD3 G6PD3    
G6PD4 G6PD4    
G6PD5 G6PD5    
G6PD6 G6PD6    
G6PD7 G6PD7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
G6PD1-G6PD7 50ul 连续稀释(0.04至30 mU / mL)
BL 50ul 稀释缓冲液(PBS)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,准备G6PD标准品(G6PD),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向G6PD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL G6PD工作溶液,以使总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光增加,在570 nm处截止。

 

参考文献

The microsomal enzyme 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 3 faces the cytoplasm and uses NADPH generated by glucose-6-phosphate dehydrogenase
Authors: Legeza B, Balazs Z, Nashev LG, Odermatt A.
Journal: Endocrinology (2013): 205

A novel cytofluorometric assay for the detection and quantification of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency
Authors: Shah SS, Diakite SA, Traore K, Diakite M, Kwiatkowski DP, Rockett KA, Wellems TE, Fairhurst RM.
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Authors: Nock ML, Johnson EM, Krugman RR, Di Fiore JM, Fitzgerald S, Sandhaus LM, Walsh MC.
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