Amplite™小鼠载脂蛋白A1(ApoA1)试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

货号V101070存储条件Multiple
规格96 Tests价格11400
Ex (nm)Em (nm)
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂,以方便,可靠,特异的方式方便地定量测定血清,血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISA测定原理

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体(mAb)。样品中的分析物被包被的mAb捕获,并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP(SA-HRP)检测。注:TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应,并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

所需材料
  1. 酶标仪可在450 nm读取
  2. ELISA平板清洗器;自动或手动(例如,多移液管或喷射瓶)、精密移液管,吸头和量筒
  3. 用于标准和样品稀释的试管
  4. 蒸馏水或去离子水 

 

安全信息

Stop溶液0.18 M H2SO4(<1%)对眼睛和皮肤有刺激性,应小心处理。由于不知道暴露的影响,因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG(0.002%),这是一种潜在的过敏原,可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息,请查阅我们网站上的《安全数据表》。

制备

在开始测定之前,让板和测定试剂达到室温(TMB底物除外,最好使用冷底物)。
计划板布局,使其一式两份,包括标准曲线,样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。



产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

1.洗涤缓冲液
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中(足以完成1个板的所有洗涤步骤)。如果在20倍浓缩物中形成了晶体,则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

2.样品稀释液
通过用蒸馏水或去离子水将样品稀释液浓缩液稀释5倍来准备所需体积的样品稀释液。对于每个板,将30 ml样品稀释液添加到120 ml水中。

3.样品
所有样品均应在样品稀释液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释,应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。

4.小鼠血清/血浆稀释指南
根据对BALB / c和C57BL / 6样品的重复分析,我们建议稀释倍数为200,000X。精确的移液非常重要,在稀释步骤之间更换吸头,并使用新鲜制成的稀释液。试剂的含量足以重复使用。

5. ELISA标准
通过添加1 ml标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为1μg/ ml的原液。不要搅拌。让标准液溶解20分钟并彻底混合。标准液应等份保存在-20°C下。避免重复冻融循环。

6.编制标准曲线
如图所示,稀释标准储备溶液以创建标准曲线。指示的数量足以重复。最后一个样品瓶用作测定背景对照,即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

 

工作溶液配制
1.检测抗体
使用后15分钟内,将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至1μg/ ml的浓度。对于每个板,在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释12μl检测抗体。

2.链霉亲和素
在使用后的15分钟内,将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板,在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。
 
操作步骤
  1. 添加样品(至少稀释2倍),标准液和测定背景对照(100μl/孔)。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板,并在室温下孵育1小时。
  2. 如上所述清洗板。
  3. 添加检测抗体(100微升/孔)。盖好板并在室温下孵育1小时。
  4. 如上所述清洗板。
  5. 加入抗生蛋白链菌素-HRP(100μl/孔)。盖好板并在室温下孵育1小时。
  6. 如上所述清洗板。
  7. 添加TMB底物(100微升/孔)。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
  8. 向所有孔(100μl/孔)中添加Stop溶液以停止显影。
  9. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。


说明书
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