Amplite 红色HRP荧光底物

货号11011存储条件 在零下15度以下保存, 避免受潮, 避免光照
规格1000 Assays价格1236
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量N/A溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

Amplite 红色HRP荧光底物是美国AAT Bioquest生产的HRP荧光底物,Amplite Red是一种灵敏的荧光过氧化物酶底物,可产生高度红色荧光产物,最大吸收为571 nm,最大发射为585 nm。与其他HRP底物如二氢荧光素和二氢罗丹明不同,Amplite Red的空气氧化极少。 Amplite Red已被广泛用于检测许多免疫测定中的HRP。Amplite Red也可用于检测痕量的H2O2。 基于Amplite Red的H2O2检测比常用的用于H2O2的东莨菪素测定灵敏度至少高一个数量级。由于H2O2是在许多酶促氧化还原反应中产生的,因此Amplite Red可用于偶联酶促反应,以检测许多氧化酶和/或相关酶/底物或辅助因子如葡萄糖,乙酰胆碱和胆固醇,L-谷氨酸,氨基酸的活性等。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 红色HRP荧光底物。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 550nm
推荐孔板: 黑色底板


产品说明书

用Amplite Red测定过氧化物酶(HRP)的方案(用于96孔板)

概述

在磷酸盐缓冲液(50μL)中加入200μMH2O2制备1X Amplite Red工作溶液

加入过氧化物酶标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育10-30分钟

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意:以下是溶液中过氧化物酶测定的推荐方案。 该说明书仅提供指导,实际应根据具体需要进行修改。

 

操作方法

A1.准备Amplite Red过氧化物酶工作溶液:

1.1Prepare 250X Amplite Red原液:将200μL无水DMSO加入小瓶中,充分混合。 应立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃重新冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X Amplite 红色过氧化物酶工作溶液:在实验当天,将Amplite Red固体溶解在DMSO中或在室温下解冻等份的Amplite Red储备溶液。通过将20μL250XAmplite Red储备溶液(来自步骤1.1)加入5mL 50mM磷酸盐缓冲液或所选缓冲液(pH7)和200μMH2O2中,制备1X工作溶液。

注意:在硫醇如DTT和β-巯基乙醇存在下,Amplite Red不稳定。 高于10μM(最终浓度)的硫醇可显著降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽(从GSH中还原)可能会干扰测定。

 

A2.在上清液中运行过氧化物酶测定:

2.1将50μL的1X Amplite 红色过氧化物酶工作溶液(来自步骤1.2)加入过氧化物酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μL1XAmplite 红色过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

2.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光(仅含测定缓冲液)用作对照,并从具有过氧化物酶反应的那些孔的值中减去。

 

使用Amplite Red测定H2O2的测定方案(一个96孔板)

概述

在磷酸盐缓冲液(50μL)中制备含有0.4 U / mL过氧化物酶的1X Amplite 红色H2O2工作溶液

添加H2O2标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育10-30分钟

监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

注意:以下是溶液中H2O2测定的推荐方案。 该说明书仅提供指导,实际应根据具体需要进行修改。

 

操作方法

B1.准备Amplite 红色H2O2工作溶液:

1.1Prepare 250X Amplite Red原液:将200μL无水DMSO加入小瓶中,充分混合。原液应立即使用不可存放过久。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃重新冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X Amplite 红色H2O2工作溶液:在实验当天,将Amplite Red固体溶于DMSO中或在室温下解冻等份的Amplite Red原液。通过将20μL250X储备溶液(来自步骤1)加入5mL 50mM磷酸盐缓冲液或所选缓冲液(pH7)和0.4单位/ mL过氧化物酶中,制备1X工作溶液。

注意:在硫醇如DTT和β-巯基乙醇存在下,Amplite Red不稳定。 高于10μM(最终浓度)的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽(从GSH中还原)可能会干扰测定。

 

B2.在上清液中进行H2O2测定:

2.1将50μL1XAmplite Red H2O2工作溶液(来自步骤1.2)加入H2O2标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总H2O2测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μL1XAmplite Red H2O2工作溶液。

2.2在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

2.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。

空白孔中的荧光(仅使用测定缓冲液)用作对照,并从具有H2O2反应的那些孔的值中减去。

 

参考文献

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说明书
Amplite 红色HRP荧光底物.pdf