Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒 红色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
咨询
产品优势
1.高灵敏度（ADP检测限<0.2 μM）
2.宽范围ATP耐受（1-300 μM）
3.兼容96孔或384孔微孔板形式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作
适用范围
用于通用型蛋白激酶检测
产品介绍
目前市售的蛋白激酶检测试剂盒主要基于两种原理：磷酸化肽段监测或ATP消耗检测。基于磷酸化肽段检测的试剂盒需要耗费大量时间优化肽段底物，而依赖ATP消耗的方法则因使用荧光素酶易受多种生物分子抑制或激活的干扰。
Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒创新性地采用ADP生成监测技术，通过荧光法直接测定与酶磷酸转移活性成正比的ADP产量。该试剂盒提供快速、简便的均相检测方案，具有以下突出优势：超高灵敏度（ADP检测限<0.2 μM）、宽范围ATP耐受（1-300 μM）、非抗体依赖、非放射性且无需洗涤步骤，能精准测定酶反应生成的ADP，是研究激酶米氏动力学及筛选激酶抑制剂的理想工具。本检测兼容96孔或384孔微孔板形式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作。
样品实验方案
简要概述
运行激酶反应（20μL）
添加ADP传感器缓冲液（20μL）
添加ADP传感器工作溶液（10μL）
在室温下孵育15分钟--1小时
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（截止= 570nm）
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1ADP Sensor I储备溶液（50X）：
将50μLDMSO（组分B3）加入到ADP传感器1（组分B1）的小瓶中，制备50X ADP传感器I储备溶液。
1.2ADP标准溶液（300 mM）：
向ADP标准品（组分C）中加入100μLDdH2O，制成300mM ADP标准溶液。
2.标准溶液配制
ADP标准配制
取300 mM ADP标准溶液，在激酶反应缓冲液中稀释10,000倍，制成30μMADP标准溶液。 取30μMADP标准溶液，在激酶反应缓冲液中进行1：3连续稀释，得到ADP标准溶液的连续稀释液。 注意：通过包含不含ADP的样品来测量背景荧光，在激酶反应缓冲液中连续稀释ADP标准品。
3.工作溶液配制
将50μL50XADP Sensor I储备溶液加入到ADP Sensor II（组件B2）的样品瓶中，制成ADP Sensor工作溶液。 注意：重组的ADP不稳定，可根据需要制作新鲜溶液，随用随配。
操作步骤
1.运行激酶反应（此步骤不提供试剂）：
1.1根据需要制备20μL（或对于384孔板10μL）激酶反应溶液/孔。 应根据需要优化激酶反应的组分（例如，特定激酶反应可能需要优化的缓冲系统）。 在大多数情况下，如果您没有优化的激酶缓冲液，ADP检测缓冲液（组分D）也可用于运行激酶反应。
1.2Amplite 荧光激酶检测试剂盒用于确定ADP的形成。
2.运行Amplite ADP分析：
2.1将20μLADP缓冲液（组分A）和10μLADP工作溶液加入每个充满20μL激酶反应溶液的孔中，使总ADP测定体积为50μL/孔。 对于384孔板，在每个充满10μL激酶反应溶液的孔中加入10μLADP传感器缓冲液（组分A）和5μLADP，使总ADP测定体积为25μL/孔。
2.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。
2.3用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光强度。
3.生成ADP校准曲线（筛选激酶抑制剂不需要）：
3.1添加20μL（对于96孔板）或10μL（对于384孔板）/孔ADP传感器缓冲液（组分A）和10μL（对于96孔板）或5μL（对于384） （间隔板）ADP传感器进入连续稀释的ADP标准品的每个孔中，使每个反应的总体积为50μL（对于96孔板）或25μL（对于384孔板）。
3.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。
3.3用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光强度。
3.4生成ADP标准曲线。
