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Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒*红色荧光兼容**流式细胞术*

英文名称:Bucculite™ Flow Cytometric XdU Cell Proliferation Assay Kit *Red Laser-Comptatible*
Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒*红色荧光兼容**流式细胞术*
价格 6559
产品规格
100 Tests

产品货号
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的可靠的方法之一。 该试剂盒采用的是检测细胞增殖的一种基本方法,它是在细胞生长的S期过程中,在存在胸腺嘧啶核苷的情况下检测DNA的合成。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖测定试剂盒使用XdU,该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。 固定细胞后,将掺入的XdU用iFluor 647叠氮化物标记。 在APC通道中观察iFluor 647标记的DNA。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖检测试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的的替代品。 它的灵敏度非常高,可用于在单细胞水平上检测活性DNA的合成。

 

适用仪器


流式细胞仪  
Ex: 633/640 nm
Em: 660/20  nm 
通道: APC 通道
实验方案

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
在流式细胞仪中使用660/20 nm滤光片组观察荧光

 

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液(100X)
将XdU(组分A)溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意:可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意:避免光线直射,并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 647叠氮化物储备溶液(200 X)
将iFluor 647叠氮化物(组分B)溶于100 µL DMSO中,制成iFluor 647叠氮化物储备溶液。
注意:可以将剩余的iFluor 647叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意:避免光线直射,并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液(20X)
将XdU反应添加剂(组分E)溶于1 mL去离子水中,制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意:剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

 

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液,制成XdU工作溶液。
注意:1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意:此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度,以确定佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液(组分C)
②40 µL CuSO4(组分D)
③5 µL iFluor 647叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意:1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

 

操作步骤

1.用XdU标记细胞
考虑到细胞在200 µL细胞培养基中,请向细胞中加入200 µL XdU工作溶液。
在适合细胞类型的佳条件下,将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

 

2.细胞固定
孵育后,除去培养基,并用PBS洗涤细胞一次。
注意:清洗步骤后,如果使用贴壁细胞,请使用ReadiUse 细胞分离缓冲液(#60010)分离它们。
向每个试管中加入200 µL的固定缓冲液(含3.7%甲醛的PBS溶液,未提供),并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液,并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入200 µL透化缓冲液(0.5%Triton®X-100的PBS溶液,未提供),并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液,并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

4.细胞染色
在试管中加入200 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下,将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次,洗涤后加入200 µL PBS。
在流式细胞仪中使用660/20 nm滤光片观察细胞中的荧光信号。

 

图示

图1.用Buccutite XdU细胞增殖检测试剂盒(Cat#22325)检测到的S期Jurkat细胞的流式细胞仪中的反应。 将Jurkat细胞以50,000个细胞/孔/ 100μL的浓度接种在6孔黑色板上过夜。 按照说明书,将细胞在37℃下用XdU处理3小时,固定并透化。 然后将细胞在染色缓冲液中用iFluor 647叠氮化物染色30分钟,并用PBS洗涤3次。 使用APC通道,通过NovoCyte流式细胞仪检测荧光响应。