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Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光*

英文名称:Bucculite™ XdU Cell Proliferation Fluorescence Imaging Kit *Deep Red Fluorescence*
Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光*
价格 6559
产品规格
200 Tests

产品货号
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中,在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒使用XdU,该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后,将掺入的XdU用iFluor 647叠氮化物标记。在Cy5观察荧光标记的DNA。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的替代品。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒。 

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Cy5 滤波片组
Em: Cy5 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
实验方案

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
使用Cy5滤波片组在荧光显微镜下观察

 

准备细胞

1.对于贴壁细胞,过夜生长的平板细胞在96孔板中为10,000至40,000个细胞/孔/100μL,在384孔板中为2,500至10,000个细胞/孔/20μL

2.对于非贴壁细胞,离心培养细胞,然后以1-2 X 106细胞/ mL(对于96孔板为10mL)悬浮细胞颗粒。

 

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液(100X)
将XdU(组分A)溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意:可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意:避免光线直射,并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 647叠氮化物储备溶液(200 X)
将iFluor 647叠氮化物(组分B)溶于100 µL DMSO中,制成iFluor 647叠氮化物储备溶液。
注意:可以将剩余的iFluor 647叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意:避免光线直射,并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液(20X)
将XdU反应添加剂(组分E)溶于1 mL去离子水中,制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意:剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

 

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液,制成XdU工作溶液。
注意:1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意:此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度,以确定浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液(组分C)
②40 µL CuSO4(组分D)
③5 µL iFluor 647叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意:1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

 

操作步骤

1.用XdU标记细胞
将等体积的XdU工作溶液添加到细胞中。
在条件下,将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

 

2.细胞固定
孵育后,除去培养基,并用PBS洗涤细胞一次。
向每个试管中加入100 µL的固定缓冲液(含3.7%甲醛的PBS溶液,未提供),并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液,并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入100 µL透化缓冲液(0.5%Triton®X-100的PBS溶液,未提供),并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液,并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

 

4.细胞染色
在试管中加入100 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下,将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次,洗涤后加入200 µL PBS。
在荧光显微镜中使用Cy5滤光片观察细胞中的荧光信号。