Cell Meter 固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*绿色荧光*

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产品优势

特异性标记断裂DNA实现简便、准确、快速的细胞凋亡检测分析。

适用范围

适用于固定细胞样本以及福尔马林固定石蜡包埋组织切片的凋亡研究

产品介绍

Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒为检测细胞凋亡引发的DNA片段化提供了高效可靠的解决方案。该检测方法是非放射性的，操作简便、结果准确且快速，可通过对 DNA 片段化的成像来监测固定细胞和组织中的凋亡情况。

TUNEL 检测利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）催化荧光素 - 12-dUTP 掺入片段化 DNA 的 3'- 羟基末端。标记有荧光素的 DNA 可通过荧光显微镜（激发488nm/发射530nm）或流式细胞仪（530/30nm发射滤光片）进行检测。

Cell Meter 固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒可用于检测固定细胞以及福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中的凋亡现象。

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4％甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70％冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用FITC滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

工作溶液配制

TdT染色液

对于1test，混合以下试剂以使总体积为51 µL；

45 µL TdT反应缓冲液（组分D）

5 µL CoCl ₂  （组分C）

0.5 µL TF5-dUTP（组分B）

0.5 µL TdT酶（组分A）。

注意：TdT染色溶液应现配现用。

操作步骤

1.根据需要处理样品。

2.用您选择的缓冲液（例如含Ca ⁺²和Mg ^+2的 PBS）洗涤细胞。

3.加入100 µL 4%多聚甲醛PBS溶液，冰上固定30分钟

4.除去固定液并用PBS洗涤细胞。

5.向细胞中加入100 µL 70％的冰冷乙醇，并在冰上孵育60分钟。

注意：在使用前，可将细胞在此步骤中于-20°C存放几天。

6.除去乙醇并用PBS洗涤细胞。

注意：对于阳性对照，将固定细胞与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca ⁺²和Mg ⁺²的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞，然后继续执行其余的操作步骤。

7.向细胞中加入50 µL TdT染色溶液，并在37°C下孵育60至120分钟。

8.除去TdT工作溶液，并用PBS洗涤细胞。

9.将细胞重悬于PBS中，流式细胞仪检测：使用530/30 nm滤光片（FITC通道）或荧光显微镜观察：配备FITC滤光片组

组织染色方案

脱蜡复水流程

1.将载玻片置于Coplin广口瓶中，新鲜二甲苯浸泡5分钟（室温），从而对组织切片（附着在载玻片上）进行脱蜡，重复一次（共2次洗涤）

2.将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100％乙醇中5分钟，以洗涤样品。

3.通过在室温下将载玻片依次浸入不同浓度乙醇：（100％，95％，85％，70％，50％）中，然后分别在室温下浸没5分钟，使样品重新水化。

4.在室温下将载玻片浸入0.85％NaCl中5分钟，以洗涤样品。

5.在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤） 

固定方案

1.通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4％多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。

2.在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤）

3.除去液体，然后将载玻片放在平坦的表面上。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。添加足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。

4.在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。

5.通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4％多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。

6.在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤） 

染色方案

可选：对于阳性对照，将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca ⁺²  和Mg ⁺²的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse，并用PBS彻底清洗细胞，并继续进行其余操作。

向样品中加入50 µL TdT染色溶液，并在37°C下孵育60至120分钟。

除去TdT工作溶液，并用PBS洗涤样品。

加入含DAPI的封固剂（AAT Bioquest Cat＃20005），并用Cy3滤光片组检测荧光强度荧光显微镜。 

试剂应用文献