Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*

货号22853存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格25 Tests价格4884
Ex (nm)544Em (nm)570
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒是一个强大的工具,可方便地检测由DNA片段化引起的细胞凋亡。该测定是非放射性且快速的。TUNEL测定法使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)催化TMR-dUTP在片段DNA的游离3'-羟基末端的掺入。通过荧光显微镜(Cy3或TRITC滤光片组)分析所得的TMR标记的DNA。它的红色发射可以方便地与GFP标记的靶标多路复用。荧光TMR标记的核苷酸的直接掺入可显着减少测试步骤。该试剂盒经过优化,可检测固定细胞和福尔马林固定,石蜡包埋的组织切片中的凋亡。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的细胞凋亡检测试剂/试剂盒。 

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 575/26nm滤波片
通道: PE通道
荧光显微镜  
激发: Cy3滤波片组
发射: Cy3滤波片组
推荐孔板: 黑色透明
 


产品说明书

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4%甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70%冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

 

工作溶液配制方案

TdT染色液

对于1test,混合以下试剂以使总体积为51 µL;
45 µL TdT反应缓冲液(组分D)
5 µL CoCl 2  (组分C)
0.5 µL TF5-dUTP(组分B)
0.5 µL TdT酶(组分A)。
注意:TdT染色溶液应立即使用。

 

操作步骤

  1. 根据需要处理样品。
  2. 用您选择的缓冲液(例如含Ca +2和Mg +2的 PBS)洗涤细胞。
  3. 通过在PBS中加入100 µL 4%多聚甲醛固定细胞,并在冰上孵育30分钟。
  4. 除去固定液并用PBS洗涤细胞。
  5. 向细胞中加入100 µL 70%的冰冷乙醇,并在冰上孵育60分钟。
    注意:在使用前,可将细胞在此步骤中于-20°C存放几天。
  6. 除去酒精并用PBS洗涤细胞。
    注意:对于阳性对照,将固定细胞与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞,然后继续执行其余的操作步骤。
  7. 向细胞中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  8. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤细胞。
  9. 将细胞重悬于PBS中,并使用575/26 nm滤光片(PE通道)通过流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

 

组织染色方案

去石蜡和水化方案

  1. 通过将载玻片在Coplin广口瓶中在室温下浸入新鲜的二甲苯中5分钟,从而对组织切片(附着在载玻片上)进行脱蜡。再重复一次。(共2次洗涤)
  2. 将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100%乙醇中5分钟,以洗涤样品。
  3. 通过在室温下将载玻片浸入各种浓度的酒精(100%,95%,85%,70%,50%)中,然后分别在室温下浸没5分钟,使样品重新水化。
  4. 在室温下将载玻片浸入0.85%NaCl中5分钟,以洗涤样品。
  5. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 

 

固定方案

  1. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  2. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤)
  3. 除去液体,然后将载玻片放在平坦的表面上。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。添加足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。
  4. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。
  5. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
  6. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟,以洗涤样品。重复一遍。(共2次洗涤) 

 

染色方案

  1. 可选:对于阳性对照,将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2  和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse,并用PBS彻底清洗细胞,并继续进行其余操作。
  2. 向样品中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分钟。
  3. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗涤样品。
  4. 加入含DAPI的封固剂(AAT Bioquest Cat#20005),并用Cy3滤光片组检测荧光强度荧光显微镜。 

 

图示

图1. 用 HeLa细胞进行TUNEL分析的荧光图像。固定HeLa细胞,并在37°C下分别使用及不使用DNAse处理60分钟。然后将细胞用Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒染色。DNA链断裂在DNAse处理的细胞中表现出强烈的荧光染色。使用Cy3滤光片组在荧光显微镜下采集信号。

 

 

参考文献

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说明书
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