活性氧 Cell Meter 荧光法线粒体超氧化物活性检测试剂盒

Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测线粒体的试剂盒，线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低至中等水平的超氧化物的产生对于许多基本细胞过程的适当调节是至关重要的，包括基因表达，信号转导和肌肉适应耐力运动训练。不受控制的线粒体超氧化物产生可引发细胞氧化损伤，其导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。细胞内线粒体超氧化物的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响非常重要。Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂MitoROS 520来量化活细胞中的超氧化物水平.MitoROS 520具有细胞渗透性，能够快速，有选择地检测线粒体中的超氧化物。它在与超氧化物反应时产生绿色荧光，并且在Ex / Em = 490 / 520nm处可以容易地读取所得荧光。Cell Meter 荧光线粒体超氧化物活性测定试剂盒提供灵敏的一步荧光测定法，用于检测活细胞中的线粒体超氧化物，孵育1小时。该试剂盒可用于流式细胞仪和荧光显微镜应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒。 

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

 

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荧光显微镜
Ex:	FITC 滤波片组
Em：	FITC 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板
滤波片组:	FITC 滤波片组

样本实验方案

概述

适用于荧光显微镜：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.添加MitoROS™520工作解决方案

4.将细胞在37°C染色60分钟

5.监测Ex / Em = 490 / 530nm处的荧光增加

 

适用于流式细胞仪：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.在37°C下染色细胞60分钟

4.用流式细胞仪监测荧光强度

 

操作步骤

对于荧光显微镜/ 96孔微孔板：

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在培养基或所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用5μM抗霉素A（AMA）在37°C处理RAW 264.7巨噬细胞2小时以诱导超氧化物。 

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到细胞板中。

4.将细胞在37°C孵育1小时，并使用荧光显微镜和FITC过滤器拍摄图像。

 

对于流式细胞仪：

1.根据需要处理细胞。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意我们用50μM抗霉素A（AMA）在37℃处理Jurkat细胞2小时以诱导超氧化物。

3.将1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）细胞加入细胞中。

4.将细胞在5％CO 2,37℃培养箱中孵育1小时，并使用FITC通道中的流式细胞仪监测荧光强度（Ex / Em = 488 / 530nm）。

 

参考文献

Comparison of the detrimental features of microglia and infiltrated macrophages in traumatic brain injury: A study using a hypnotic bromovalerylurea
Authors: Naoki Abe, Mohammed E Choudhury, Minori Watanabe, Shun Kawasaki, Tasuku Nishihara, Hajime Yano, Shirabe Matsumoto, Takehiro Kunieda, Yoshiaki Kumon, Toshihiro Yorozuya
Journal: Glia (2018)

 

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