Cell Meter 比色法细胞内脂质氧化损伤(MDA)检测试剂盒

Cell Meter 比色法细胞内脂质氧化损伤(MDA)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测MDA的试剂盒，脂质过氧化物的特征在于不饱和脂肪酸，磷脂，糖脂，胆固醇酯和胆固醇的氧化降解。丙二醛（MDA）是脂质过氧化常用的生物标志物之一。 MDA的测量历史上依赖于与硫代巴比妥酸（TBA）的反应以产生可以在532nm处比色测量的产物或在Ex / Em = 530550nm处以荧光法测量的产物。但是，TBA分析具有相当多的限制。（1）该反应对MDA没有特异性。（2）TBA-MDA反应需要在酸性条件下进行。（3）测定需要在高温下进行，一般在90-100ºC。由于这些限制，商业的基于TBA的MDA测定非常繁琐。这种Cell Meter 比色脂质过氧化（MDA）定量试剂盒提供了快速，方便的方法来测量MDA而不需要TBARS加热步骤。 MDA Blue 与MDA反应产生蓝色产物，用吸光度酶标仪在695 nm测量。该测定非常快速并且对MDA具有特异性，而与其他醛的干扰很小。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 比色法细胞内脂质氧化损伤(MDA)检测试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加MDA标准和/或测试样品（50 µL）
2.准备并添加MDA Blue （10 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.加入反应溶液（40 µL）
5.监测OD在695 nm处的增加

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
MDA标准储备液（100 mM）：
将100 µL ddH2O加入MDA标准品（组分C）中，并充分混合。 注意：未使用的MDA储备溶液应以-20℃的形式等次储存。

 

2.标准溶液配制

MDA标准
将4μLMDA标准溶液（100 mM）添加到996μL稀释缓冲液（组分B）中以获得MDA标准溶液（400μM）。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准（MDA1-MDA7）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MDA1	MDA1	...	...
MDA2	MDA2	...	...
MDA3	MDA3
MDA4	MDA4
MDA5	MDA5
MDA6	MDA6
MDA7	MDA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
MDA1-MDA7	50ul	连续稀释
BL	50ul	稀释缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样品

MDA测定

1.加入50 µL MDA标准品，空白对照和测试样品以底部96孔微孔板（如表1和表2所示）。

2.将10 µL /孔的MDA Blue （组分A）添加到MDA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中。 注意：对于384孔板，将25 µL样品，5 µL MDA Blue 溶液添加到每个孔中。 注意：请分装成一次性使用的组分A，并在-20ºC下闲置存放，并避免光照。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.加入40 µL反应溶液（组分D）使总测定体积为100 µL /孔。 注意：对于384孔板，请添加20 µL反应溶液（组分D），使总测定体积为50 µL /孔。

5.使用吸光度板读数器监控吸光度，并在695〜700 nm的OD处进行路径检查校正。

 

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