Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测

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产品优势  

1.水溶性好：比JC-1染料水溶性显著提升

2.性能表现好： 信号稳定性强，灵敏度高，背景干扰低，数据可靠性高

适用范围

用于标记活细胞

产品介绍

尽管JC-1被众多实验室广泛使用，但其极差的水溶性带来了极大不便。即使在1 µM的低浓度下，JC-1在水性缓冲液中仍易发生沉淀。为满足高染料浓度需求而开发的JC-10，成为JC-1的更优替代品。相较于JC-1，JC-10具有显著改善的水溶性。该染料能选择性进入线粒体，并随着膜电位升高发生可逆的颜色变化——从绿色转变为橙色。这一特性源于膜极化时JC-10可逆性聚集体的形成，导致发射光波长从520 nm（单体形式）红移至570 nm（积聚集体）。当以490 nm激发时，随着线粒体膜极化程度增加，JC-10的颜色会从绿色可逆地变为绿橙色。两种颜色均可通过流式细胞仪标配滤光片检测：绿色荧光在FL1通道分析，绿橙色荧光则在FL2通道分析。

除流式细胞术外，该染料还可用于荧光成像与荧光微孔板检测平台。本试剂盒提供所有关键组分及优化后的实验方案，专为检测线粒体膜电位丢失的细胞凋亡而设计。其荧光检测原理基于阳离子脂溶性JC-10染料对线粒体膜电位变化的响应：在正常细胞中，JC-10富集于线粒体基质并形成红色荧光聚集体；而在凋亡或坏死细胞中，JC-10以单体形式存在并呈现绿色荧光。

本试剂盒针对流式细胞术筛选凋亡激活剂/抑制剂进行了优化。同时我们还提供适用于高通量筛选的96孔和384孔荧光微孔板规格试剂盒（货号22800）

96孔板样品分析

概述

1.将待测化合物处理的细胞密度调整至 5 × 10⁵ ~ 1 × 10⁶ 个细胞/mL。

2.取 500 µL JC-10 工作液 重悬细胞（每管 2-5 × 10⁵ 个细胞）。

3.在 37°C 或室温 下孵育 15-60 分钟（避光）。

4.流式检测：使用 FL1 通道（绿色荧光，单体信号）和 FL2 通道（橙色荧光，聚集体信号）进行分析

注意：实验前，请将所有试剂盒组分 室温解冻。

工作液配制

取 25 µL 200X JC-10（组分 A） 加入 5 mL 检测缓冲液 A（组分 B），混匀配制成 JC-10 工作液（避光保存）。

细胞样本制备指南，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

操作步骤

1.使用待测化合物处理细胞一定时间以诱导凋亡，并设置平行对照实验。

阴性对照：仅使用溶剂处理细胞。

阳性对照：用 2-10 µM FCCP 或 CCCP 在 37°C、5% CO₂ 培养箱中处理细胞 15-30 分钟。

注意：CCCP或FCCP可与JC-10工作液同时加入。针对不同细胞系，可能需要对CCCP或FCCP进行浓度梯度优化以获得好的实验效果。

2. 离心收集细胞，调整至 2-5 × 10⁵ 个细胞/管。  

注：贴壁细胞需用 0.5 mM EDTA 轻柔消化以保持细胞完整性，并在 JC-10 染色前用含血清培养基洗涤一次。

3.用 500 µL JC-10 工作液重悬细胞。避光条件下，于室温 或 37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育 15-60 分钟。

注：孵育时间需根据细胞类型和浓度优化。

4.使用流式细胞仪监测荧光强度

凋亡细胞检测：通过FL1通道（绿色荧光）监测JC-10单体信号

正常细胞检测：通过FL2通道（橙红色荧光）监测JC-10聚集体信号

注意：1.细胞设门分析时需排除碎片干扰

          2.荧光补偿校正建议采用FCCP/CCCP处理的阳性对照细胞

典型流式参数（以 BD FACS Calibur 为例）

注：以下初始条件需根据细胞类型、培养条件及仪器差异调整。

FL1 PMT 电压：366

FL2 PMT 电压：430

补偿设置：

FL1 扣除 47.2% FL2

FL2 扣除 47.0% FL1

试剂应用文献