Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光

货号22844存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格50 Tests价格3840
Ex (nm)549Em (nm)648
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞凋亡的试剂盒,DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口,该缺口可通过TdT进行鉴定,TdT是一种酶,该酶催化添加标记物的dUTP的添加。现有的所有TUNEL分析均包含剧毒的椰油酸钠,这可能会诱导细胞凋亡并降低DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter™TUNEL细胞凋亡测定试剂盒使用了不含甲藻酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于将我们独特的专有荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化,可在不使用抗体的情况下直接检测分离的或附着的细胞中的细胞凋亡。该试剂盒可提供所有必需成分,并具有优化的测定方案。适用于荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 620/20nm滤波片
通道: PE-Cy5通道
荧光显微镜  
激发: TRITC滤波片
发射: TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 550nm滤波片
发射: 590-650nm滤波片
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物准备细胞。
  2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
  3. 洗涤细胞。
  4. 用4%甲醛(可选)固定细胞。
  5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm(截止= 515 nm)处的荧光强度。

 

溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green(组分A)添加到50μL的反应缓冲液(组分B)中,使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意:应单独评估每个细胞系,以确定最佳细胞密度。

 

实验步骤

1.根据您的特定协议,将细胞培养至最佳密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞,我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔,对于非贴壁细胞,建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时,在每种标记条件下,用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意:我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时,以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色:

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液,并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液(组分B)。
2.6使用Ex / Em = 550/590-650 nm(Cut off= 570 nm)的荧光酶标仪,带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选:从步骤5中移出反应缓冲液,并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次,并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 550/590-650nm(Cut off= 570 nm)的荧光酶标仪,带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选:用1X Hoechst(组分C)在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核,以进行图像分析

 

参考文献

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In situ localization of apoptosis using TUNEL
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说明书
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