Cell Meter 活细胞 TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞。

2.与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。

3.洗涤细胞。

4.可选：用4％甲醛固定细胞。

5.使用TRITC滤光片的荧光显微镜或FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度

细胞制备

根据具体实验方案将细胞培养至适合诱导凋亡的密度。96孔板培养的贴壁细胞，建议每孔接种30,000至50,000个细胞；悬浮细胞，建议密度为1-2×10^6个细胞/mL。同时需为每种标记条件培养相同密度的未诱导阴性对照组细胞。

注：我们使用100 nM至1 µM的星形孢菌素处理HeLa细胞4小时以诱导细胞凋亡（详见图1）。
细胞样本制备指南请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

工作溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Red（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。

注意：需根据具体细胞系优化细胞密度

实验步骤

染色和固色：

1.吸弃细胞培养基。

2.向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。

3.在37°C下孵育30-60分钟。

4.吸弃工作液，用200 µL/孔PBS洗涤1-2次

5.向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。

6.使用TRITC滤光片荧光显微镜或FL3通道流式细胞仪检测荧光强度

7.可选步骤：

从步骤5吸弃反应缓冲液，每孔加入100 µL 4%甲醛固定液（需自备）。

注：悬浮细胞需加入适量（如2×10^6个细胞/mL）4%甲醛固定液。

8.室温固定20-30分钟

9.吸弃固定液

10.用PBS洗涤2-3次，每孔换用100 µL PBS

11.使用TRITC滤光片荧光显微镜或FL3通道流式细胞仪检测荧光强度

12.可选步骤：

用1X Hoechst（组分C，Ex/Em = 350/460 nm）进行细胞核染色用于图像分析

试剂应用文献