Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 蓝色荧光,适合微孔板检测

我们的Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞活性的试剂盒。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。该试剂盒使用我们专有的基于荧光小分子的Apopxin™PS探针，该探针以比膜联蛋白V（Kd <10 nM）高得多的亲和力特异性结合PS。与膜PS结合后具有蓝色荧光。它可以以酶标仪，显微镜和流式细胞仪的形式使用，而大多数其他商业凋亡检测试剂盒只能与显微镜或流式细胞仪平台一起使用。

---

荧光酶标仪
Ex:	405 nm
Em：	450 nm
Cutoff：	420 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2.加入等量的Apopxin™Violet 450工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.观察Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）的荧光强度（底部读取模式）或使用装有紫罗兰色滤光片的荧光显微镜

 

溶液配制

工作溶液配制

将10μL100X Apopxin™紫罗兰色450（组分A）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin™紫罗兰色450工作溶液。 

 

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO2、37°C​​的培养箱中孵育所需的时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞需要4-6小时）以诱导凋亡。注意：由于在405 nm激发时，从380至490 nm的宽发射光谱，某些化合物（例如喜树碱）可能会产生假阳性反应。

3.在每个孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin™Violet 450工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）或使用带有紫色滤光片的荧光显微镜对图像池进行荧光强度监测。

图1.用Apopxin™Violet 450偶联物染色的HeLa细胞的荧光图像。 Jurkat细胞在37℃下不使用（左）或用1μM星形孢菌素（右）处理4小时。 使用带有紫色滤光片组的显微镜（激发＝ 405nm）测量荧光强度。

参考文献

Physiological effects of the herbicide glyphosate on the cyanobacterium Microcystis aeruginosa
Authors: Wu, Liang and Qiu, Zhihao and Zhou, Ya and Du, Yuping and Liu, Chaonan and Ye, Jing and Hu, Xiaojun
Journal: Aquatic Toxicology (2016): 72--79

Tumor-selective mitochondrial network collapse induced by atmospheric gas plasma-activated medium.
Authors: Saito, Kosuke and Asai, Tomohiko and Fujiwara, Kyoko and Sahara, Junki and Koguchi, Haruhisa and Fukuda, Noboru and Suzuki-Karasaki, Miki and Soma, Masayoshi and Suzuki-Karasaki, Yoshihiro
Journal: Oncotarget (2016)

Inhibition of malignant phenotypes of human osteosarcoma cells by a gene silencer, a pyrrole--imidazole polyamide, which targets an E-box motif
Authors: Taniguchi, Masashi and Fujiwara, Kyoko and Nakai, Yuji and Ozaki, Toshinori and Koshikawa, Nobuko and Toshio, Kojima and Kataba, Motoaki and Oguni, Asako and Matsuda, Hiroyuki and Yoshida, Yukihiro and others
Journal: FEBS open bio (2014): 328--334

Detection of apoptosis based on the interaction between annexin V and phosphatidylserine
Authors: Liu T, Zhu W, Yang X, Chen L, Yang R, Hua Z, Li G.
Journal: Anal Chem (2009): 2410

Evaluation of cell surface expression of phosphatidylserine in ovarian carcinoma effusions using the annexin-V/7-AAD assay: clinical relevance and comparison with other apoptosis parameters
Authors: Dong HP, Holth A, Kleinberg L, Ruud MG, Elstr and MB, Trope CG, Davidson B, Risberg B.
Journal: Am J Clin Pathol (2009): 756

Mobilization of lysosomal calcium regulates the externalization of phosphatidylserine during apoptosis
Authors: Mirnikjoo B, Balasubramanian K, Schroit AJ.
Journal: J Biol Chem (2009): 6918

Peptidic targeting of phosphatidylserine for the MRI detection of apoptosis in atherosclerotic plaques
Authors: Burtea C, Laurent S, Lancelot E, Ballet S, Murariu O, Rousseaux O, Port M, V and er Elst L, Corot C, Muller RN.
Journal: Mol Pharm (2009): 1903

Suicidal membrane repair regulates phosphatidylserine externalization during apoptosis
Authors: Mirnikjoo B, Balasubramanian K, Schroit AJ.
Journal: J Biol Chem (2009): 22512

Trivalent methylated arsenical-induced phosphatidylserine exposure and apoptosis in platelets may lead to increased thrombus formation
Authors: Bae ON, Lim KM, Noh JY, Chung SM, Kim SH, Chung JH.
Journal: Toxicol Appl Pharmacol (2009): 144

Discovery of a phosphatidylserine-recognizing peptide and its utility in molecular imaging of tumour apoptosis
Authors: Thapa N, Kim S, So IS, Lee BH, Kwon IC, Choi K, Kim IS.
Journal: J Cell Mol Med (2008): 1649