Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒 绿色荧光

货号22750存储条件
规格100 Tests价格2460
Ex (nm)Em (nm)
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体,参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网(ER)中内置的蛋白质和脂质,并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。该Cell Navigator™NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便,快速的方法,可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白(C6-NBD-Ceramide-BSA)形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。

点击查看光谱

点击查看细胞培养方案



产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 根据需要处理细胞
  2. 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
  3. 更换染色缓冲液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
  4. 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
  5. 可选:用4%甲醛固定细胞

 

储备溶液配制

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液(100X):
将100 µL DMSO(组分C)加入小瓶C6 NBD神经酰胺(组分A)中并充分混合。注:将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。

 

工作溶液配制

1. C6 NBD神经酰胺工作液:
将10 µL NBD神经酰胺原液(100X)添加到990 µL染色缓冲液(组分B)中,制成NBD神经酰胺工作液。
可选:将10 µL Hoechst 33342(组分D)添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。

 

操作步骤

  1. 接种并根据需要处理细胞。
  2. 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
  3. 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
  4. 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液,并用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)代替。
  5. 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
  6. 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
  7. 从步骤4中除去染色缓冲液,然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。 注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。(可选)
  8. 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次,然后用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)替换。(可选)

 

图例

图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟,然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。

 

参考文献

Molecular determinants of ER-Golgi contacts identified through a new FRET-FLIM system
Authors: R. Venditti
Journal: J Cell Biol (2019): 1055-1065

A Golgi Lipid Signaling Pathway Controls Apical Golgi Distribution and Cell Polarity during Neurogenesis
Authors: Z. Xie
Journal: Dev Cell (2018): 725-740 e4

A putative calcium-ATPase of the secretory pathway family may regulate calcium/manganese levels in the Golgi apparatus of Entamoeba histolytica
Authors: M. A. Rodriguez
Journal: Parasitol Res (2018): 3381-3389

Activation of neutral sphingomyelinase 2 by starvation induces cell-protective autophagy via an increase in Golgi-localized ceramide
Authors: M. J. Back
Journal: Cell Death Dis (2018): 670

Functions of neutral ceramidase in the Golgi apparatus
Authors: W. Sakamoto
Journal: J Lipid Res (2018): 2116-2125

Regulation of glucosylceramide synthesis by Golgi-localized phosphoinositide
Authors: Y. Ishibashi
Journal: Biochem Biophys Res Commun (2018): 1011-1018

Structure of the Golgi apparatus is not influenced by a GAG deletion mutation in the dystonia-associated gene Tor1a
Authors: S. B. Mitchell
Journal: PLoS One (2018): e0206123

An inducible ER-Golgi tether facilitates ceramide transport to alleviate lipotoxicity
Authors: L. K. Liu
Journal: J Cell Biol (2017): 131-147

Ceramide Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Trans Golgi Region at Organelle Membrane Contact Sites
Authors: K. Hanada
Journal: Adv Exp Med Biol (2017): 69-81

Endoplasmic reticulum is the sorting core facility in the Golgi-lacking protozoan Giardia lamblia
Authors: N. Zamponi
Journal: Traffic (2017): 604-621



说明书
Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒 绿色荧光 .pdf