Cy3 NHS酯 CAS 146368-16-3

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产品优势

Cyanine 3 monosuccinimidyl ester 是一种胺反应性的橙色荧光染料，它能与蛋白质和抗体形成稳定的酰胺键，被广泛用于制备明亮、耐光性强的生物偶联物，适用于显微镜检查和流式细胞分析。

橙色荧光： 提供明亮、稳定的荧光信号，其最佳激发波长为532纳米，完美适用于显微镜和流式细胞仪的激光激发。

胺反应性标记： 在pH 8.5的条件下，与蛋白质赖氨酸残基高效结合，形成稳定的酰胺键，实现高效的蛋白质和抗体标记。

多色成像应用： 与FITC和Cy5染料兼容，可用于免疫荧光和荧光原位杂交（FISH）中的三重标记实验。

适用范围

用于标记肽、蛋白和寡核苷酸

产品介绍

AAT Bioquest生产的Cy3,NHS酯是胺反应性染料，用于标记氨基。常被用于生物分子标记，荧光成像及其他荧光生物分析。Cy3染料在与蛋白质结合后荧光增强。Cy3® NHS酯（GE Healthcare）与 Cyanine 3 monosuccinimidyl ester 在化学上是等效的活性染料，用于通过靶向氨基对生物分子进行荧光标记。

使用方法

Cy3 NHS酯的分子量为829.03道尔顿。它以红色粉末形式提供，可使用DMSO复溶。其NHS酯官能团允许其轻松与具有伯胺基团（如蛋白质和抗体的赖氨酸残基或胺修饰的寡核苷酸）的目标物发生偶联。标记反应会在染料和生物分子之间形成共价键；为获得好的效率，反应应在pH = 8.5 ± 0.5的缓冲液中进行。反应完成后，应计算偶联物的标记度（DOL）。这一点很重要，因为过度标记（即高DOL）可能导致Cy3荧光基团的自淬灭。

激发/发射

Cy3有两个重要波长：激发峰在555nm，发射峰在569nm。当被合适的光源（如532nm或555nm）激发时，它会发射黄色荧光。因此，兼容的荧光通道包括Cy3或TRITC滤光片组。Cy3的荧光对pH变化具有相当的耐受性，可适应pH 4至pH 10的范围。

应用

Cy3可被偶联到抗体上，用于免疫荧光（IF）和免疫细胞化学（ICC）应用。例如，用小鼠抗微管蛋白一抗处理细胞，随后使用Cy3标记的山羊抗小鼠IgG二抗，可用于可视化细胞骨架结构。

第二个应用是利用Cy3标记寡核苷酸。在荧光原位杂交（FISH）中，Cy3-寡核苷酸探针能够对细胞内的遗传物质进行空间定位。与淬灭剂结合使用时，Cy3-寡核苷酸偶联物可用作实时PCR技术中的TaqMan探针（或分子信标）

其他形式

Cy3也可提供带有马来酰亚胺基团的形​​式。这允许其与呈现巯基（如半胱氨酸残基）的蛋白质和抗体进行偶联。为了在化学合成过程中将Cy3掺入寡核苷酸，可使用Cy3亚磷酰胺。在此过程中，亚磷酰胺从3'端到5'端方向添加。

其他相关染料

Cy5是与Cy3属于同一家族的荧光染料，是其一种替代选择。它的激发波长为651nm，发射波长为670nm。

Cy3B是Cy3的一种类似物，更能抵抗内部退激发，因此实测荧光信号更强，且光稳定性好。

iFluor® 555是一种光谱相似的荧光团，具有更高的水溶性和亮度，同时光漂白性更弱，成本更低。

试剂应用文献