活细胞染色 CytoTell 绿色

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适用范围

用于细胞增殖

 

产品介绍

流式细胞术结合荧光染色是分析异质性细胞群体的强大工具。在现有荧光染料中，CFSE 是首选的细胞增殖指示剂，用于活细胞分析。然而，使用 CFSE 监测细胞增殖存在一些缺陷：1）细胞毒性强——CFSE会非选择性结合所有氨基基团，从而改变关键胞内蛋白功能（如细胞膜GPCRs）；2）响应迟缓且操作不便——第二代细胞的荧光强度较第一代降低10倍以上，需等待至少一个增殖周期才能开始分析；3）需去除培养基——因CFSE会与培养基组分反应，检测前必须更换培养体系。

CytoTell™ UltraGreen作为CytoTell™ Green的升级产品，具有明显优势：

1）CytoTell™ UltraGreen 在细胞内保留性好；

2）CytoTell UltraGreen的响应速度更快、操作更便捷——第一代和第二代细胞之间的荧光强度差距明显缩小，随细胞分裂，CytoTell™ UltraGreen 在子细胞间平均分配，其荧光强度会逐代减半，这一特性可用于检测；

3）CytoTell™ UltraGreen 比 CFSE 灵敏度高，最多可观察到 9 代细胞；

4）CytoTell™ UltraGreen 比 CFSE 稳定性好。其储备液可在室温下存放数天，还可用于标记细胞的长期追踪。

使用双参数图进行分析可更好地分辨每一代细胞，尤其是未分裂细胞与第一代细胞之间的区分。CytoTell™ UltraGreen 的激发峰为 492 nm，可被蓝色（488 nm）激光线激发，因此与 FITC 滤光片组兼容。

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37 ^o C 下将染料与细胞共孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

重要说明

实验开始前，将试剂盒所有组分置于室温。

注：CytoTell™染料为冻干粉末。若在 - 20°C 下避光储存且避免反复冻融，其稳定性至少可达 6 个月。

 

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装为单次使用量，制备后保存于-20°C，避免反复冻融

CytoTell 染料储备液（500X）：

向染料粉末瓶中加入500 µL DMSO，涡旋振荡混匀制备储备液（500X）

注意：储备液需现配现用；剩余溶液应分装后于<-20°C冷冻保存。避免反复冻融并避光

 

工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：

使用前将500X DMSO储备液按1:500比例用HHBS缓冲液（Hanks平衡盐溶液含20 mM Hepes）或自选pH 7缓冲液稀释（如：1 µL 500X储备液加入500 µL缓冲液），涡旋振荡混匀

注意：工作液终浓度需根据不同细胞类型和/或实验条件进行优化，建议测试至少跨越十倍浓度的梯度范围。例如CytoTell™ Red在某些细胞类型中的使用量可能远低于推荐浓度

 

实验操作流程

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ⁵个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。

可选：可不移除培养基直接向细胞中加入500X DMSO储备液（如：向500 µL细胞悬液中加入1 µL 500X储备液）

4.室温或37°C将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜在相应激发/发射波长下监测荧光变化