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D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5

英文名称:D-Luciferin, free acid *CAS#: 2591-17-5*
产品参数
Ex (nm)385Em (nm)529
分子量280.32溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

D-荧光素是流行的多功能生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫(Photinus pyralis)和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP进行活化荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值,当荧光素和ATP过量存在时,光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合,并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外,在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域,荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为存在于所有生物体中的ATP需要发光,这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量,以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。

Luc的Ex/Em及其他相关内容链接:Spectral properties of luciferin and EGFP. A: Normalized excitation and... | Download Scientific Diagram (researchgate.net)

D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

百萤问号:荧光素酶到底该如何检测?

实验方案

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液,混合均匀。随配随用,或使用等分试样,其他等分储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养的细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

 

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2通过0.2μm过滤器过滤溶液。随配随用或单独使用等分试样,其余等分储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像前10-15分钟在腹膜内(i.p.)注射荧光素。

注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。

 

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 随配随用或单独使用等分试样,其余等分储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。

3.4根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液的普利光度计。

3.5注入200μl荧光素工作溶液。

 

注意1:D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备,并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2:D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3:如果检测ATP,请戴上手套并使用无ATP容器,尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压水进行所有试剂制备。

 

试剂应用文献

Human carboxylesterase 1A plays a predominant role in the hydrolytic activation of remdesivir in humans
Authors: Zhang, Feng and Li, Hong-Xin and Zhang, Tian-Tian and Xiong, Yuan and Wang, Hao-Nan and Lu, Zhen-Hui and Xiong, Lei and He, Yu-Qi and Ge, Guang-Bo
Journal: Chemico-biological interactions (2021): 109744
 
Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Pichler, Martin and Stiegelbauer, Verena and Vychytilova-Faltejskova, Petra and Ivan, Cristina and Ling, Hui and Winter, Elke and Zhang, Xinna and Goblirsch, Matthew and Wulf-Goldenberg, Annika and Ohtsuka, Masahisa and others, undefined
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres--0497
 
C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li, Li-Li and Wang, He-Rong and Zhou, Zhi-Yi and Luo, Jing and Wang, Xiao-Li and Xiao, Xiang-Qian and Zhou, Yu-Bai and Zeng, Yi
Journal: PloS one (2016): e0149748
 
Identification of a novel protein kinase a inhibitor by bioluminescence-based screening
Authors: Ishimoto, Tetsuya and Azechi, Kenji and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969--1974
 
Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Ishimoto, Tetsuya and Azechi, Kenji and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969--1974
 
Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Mano, Hiroki and Ishimoto, Tetsuya and Okada, Takuya and Toyooka, Naoki and Mori, Hisashi
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689--1693

 

参考文献

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Authors: Law GH, G and elman OA, Tisi LC, Lowe CR, Murray JA.
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Determination of p-glycoprotein ATPase activity using luciferase
Authors: Matsunaga T, Kose E, Yasuda S, Ise H, Ikeda U, Ohmori S.
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Expression of firefly luciferase in Candida albicans and its use in the selection of stable transformants
Authors: Doyle TC, Nawotka KA, Purchio AF, Akin AR, Francis KP, Contag PR.
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PET imaging and optical imaging with D-luciferin [11C]methyl ester and D-luciferin [11C]methyl ether of luciferase gene expression in tumor xenografts of living mice
Authors: Wang JQ, Pollok KE, Cai S, Stantz KM, Hutchins GD, Zheng QH.
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Bioluminescence of monolayers of firefly luciferase immobilized on graphite
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Bovine serum albumin displays luciferase-like activity in presence of luciferyl adenylate: insights on the origin of protoluciferase activity and bioluminescence colours
Authors: Viviani VR, Ohmiya Y.
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Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect
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Two different domains of the luciferase gene in the heterotrophic dinoflagellate Noctiluca scintillans occur as two separate genes in photosynthetic species
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Effect of different salts and detergents on luciferin-luciferase luminescence of the enchytraeid Fridericia heliota
Authors: Rodionova NS, Petushkov VN.
Journal: J Photochem Photobiol B (2006): 123
 
Evaluation of firefly luciferase bioluminescence mediated photodynamic toxicity in cancer cells
Authors: Schipper ML, Patel MR, Gambhir SS.
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