D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7

货号12510存储条件f/l
规格100 mg价格1200
Ex (nm)328Em (nm)533
分子量302.3溶剂Water
产品详细介绍


简要概述

D-荧光素是最流行和多功能的生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫(Photinus pyralis)和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP活化的荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值,当荧光素和ATP过量存在时,光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合,并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外,在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为存在于所有生物体中的ATP需要产生发光。这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量,以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。

D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

百萤问号:荧光素酶到底该如何检测?



产品说明书

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液。混合均匀。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

 

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2过滤器通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像前10-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素。

注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。

 

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

3.4根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液的普利光度计。

3.5注入200μl荧光素工作溶液,无延迟,10秒积分时间。

 

注意1:D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备,并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2:D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3:如果检测ATP,请戴上手套并使用无ATP容器,尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。

 

参考文献

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产品名称 货号
D-荧光素钾盐 CAS 115144-35-9 Cat#12505


说明书
D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7.pdf