细胞膜荧光探针DiA

货号22030存储条件f/l
规格25 mg价格948
Ex (nm)492Em (nm)613
分子量787.04溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        细胞膜荧光探针DiA是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。它们在真核生物中是丰富的,属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸(PS),其通常保持在细胞膜的内叶(细胞质侧)。在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具,旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

        膜联蛋白V结合物在Ca2 +存在下与凋亡细胞表面上的PS结合,它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此,我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用,以区分死细胞和凋亡细胞。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiA。

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产品说明书

样品分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加膜联蛋白V缀合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。

 

参考文献

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说明书
细胞膜荧光探针DiA.pdf