细胞膜荧光探针DiA

货号22030存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格25 mg价格1008
Ex (nm)492Em (nm)613
分子量787.04溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

DiA是一种亲脂性荧光染色剂,用于标记膜和其他疏水结构。它具有环境敏感的荧光,尽管在水中呈弱荧光,但与膜或亲油生物分子(如蛋白质)结合时,荧光会大大增强。一旦应用于细胞,这种染料在细胞质膜内横向扩散,从而在最佳浓度下对整个细胞进行均匀染色。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiA。

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料(绿色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR波长更长,更适合组织染色;
DiA染料(绿色) 一种细胞膜绿色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快,并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料(橙色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外,还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料(橘色) 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后,指示细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,若细胞内荧光强度降低,即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料(红色) 染色效率高,均一,不易猝灭,细胞毒性低,背景干扰小。
DiS染料(红色) 一种细胞膜红色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快,可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料(深红色) 常用于标记细胞膜,红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

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产品说明书

样品分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加膜联蛋白V缀合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。

 

参考文献

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说明书
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