荧光碱性磷酸酶底物 DiFMUP CAS 214491-43-7

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产品介绍

DiFMUP是一种氟代MUP衍生物，常用作碱性磷酸酶的荧光底物。其酶解产物的激发/发射最大波长约为358/450 nm，与MUP的光谱特性基本一致。经磷酸酶催化水解后，DiFMUP会生成氟代4-甲基伞形酮荧光团，该荧光团的pKa值低于MUP产生的香豆素荧光团，使得DiFMUP在低pH条件下连续检测酸性磷酸酶的效能优于MUP。该底物也可用于监测蛋白磷酸酶活性。

磷酸盐底物的测定方案

概述

在Tris缓冲液（50μL）中制备10-50μM磷酸盐

添加磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）

在室温或37℃孵育30至120分钟监测荧光强度

注意：以下是溶液中磷酸酶测定的推荐方案。 该说明仅提供指导，应根据具体需要进行修改。

准备工作解决方案：

1.在溶剂中制备2至10 mM的储备溶液（见说明书中的表）。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注意1：不要使用DMSO，ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐（目录号11629）的原液，因为它可以显著提高分析背景。

注意2：避免反复冻融循环，避免光照。

2.制备2X磷酸盐工作溶液：在实验当天，将底物溶解在溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液（来自步骤1.1）。在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液（pH 8至9）（非磷酸盐缓冲液）中制备10至50μM的2X工作溶液。

在上清液中进行磷酸酶测定：

1.将50μL2X磷酸盐工作溶液（来自步骤1.2）加入磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.在所需温度下孵育反应30至120分钟，避光。

3.用荧光酶标仪检测适当滤光片组（见说明书中的表）的荧光增加。

4.空白孔中的荧光（仅用测定缓冲液）用作对照，并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去。