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活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐] CAS 596-09-8

英文名称:FDA [Fluorescein diacetate] *CAS 596-09-8*
产品参数
Ex (nm)498Em (nm)517
分子量416.38溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐]是美国AAT Bioquest生产的用于检测活细胞的荧光探针,FDA(荧光素二乙酸酯)是一种非荧光疏水性荧光素衍生物,可以通过细胞膜(包括哺乳动物和细菌细胞),因此细胞内酯酶水解产生高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累,作为细胞活力的标记。不具有完整细胞膜或活性代谢的细胞可能不会积聚荧光产物,因此不会表现出绿色荧光。FDA可以与PI染色组合使用,因为非活细胞摄取PI并将死细胞染成红色,而活细胞不吸收PI并且应该仅染色绿色。与单色分析相比,非活细胞和活细胞的这种双色分离可以提供更准确的细胞活力定量。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐]。 

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实验方案

样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞添加1到20μMFDA工作溶液

用细胞孵育染料

在室温或37℃下保持15至30分钟取出染料工作溶液

使用Ex / Em = 490/520 nm(FL1通道)的流式细胞仪进行分析

注意:以下是推荐的方案。 它只提供了一个指导方针,实际情况应根据具体需要进行修改。

 

操作步骤

1.准备2-10 mM DMSO储备溶液

将4.2mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液(1mg / ml相当于~2.4mM)

注意:应立即使用原液; 应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。 避免反复冻融循环,避免光照。

 

2.准备染料工作溶液

在使用之前,通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(pH7)稀释步骤1中的DMSO储备溶液,准备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。

 

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞:

3.1用测试化合物细胞培养一段所需的时间。

3.2离心细胞,每管2-10×105个细胞。

3.3在500μL染料工作溶液中重悬细胞(来自步骤2)。

3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞15至30分钟,避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液,用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中,得到每管2-10×105个细胞。

3.6用流式细胞仪(FL1通道)或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。

注意:对于细菌细胞染色:当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1:800稀释储备溶液时,染色是有效的,但也可以使用新鲜营养肉汤或PBS。 细菌悬浮液应用PBS稀释至每毫升105-107个生物。 可以通过将1ml溶液施加到.45μm过滤器(25mm)并真空过滤除去溶液,然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟来染色细菌。

 

参考文献

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