FITC-xtra 异硫氰酸荧光素
货号135存储条件F/L
规格5 mg价格2340
Ex (nm)496Em (nm)524
分子量620.52溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        FITC-xtra 异硫氰酸荧光素是美国AAT Bioquest生产的荧光素,虽然FITC仍然是用于制备绿色荧光生物共轭物的最流行的荧光标记染料,但是FITC存在某些限制,例如用于显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。与相应的FITC缀合物相比,用FITC-xtra制备的蛋白质缀合物是非常优越的。FITC-xtra结合物比FITC结合物明显更亮,并且更加光稳定。另外,FITC-xtra的荧光不受pH(4-10)的影响。这种pH不敏感性是对FITC的重大改进,FITC仅在pH大于9时才发出其最大荧光.FITC-xtra具有几乎相同FITC的光谱特性。此外,FITC-xtra在温和缀合条件下比FITC产生高得多的缀合产率。像5-FITC,FITC-xtra抗体缀合物具有理想地适合于488nm激光线的激发,使其成为相应的FITC标记的抗体缀合物的替代物。在测试的相同条件下,FITC-xtra抗体缀合物提供比相应的FITC标记的缀合物高得多的信号/背景比。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的FITC-xtra 异硫氰酸荧光素。 

点击查看光谱



产品说明书

实验方案

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(例如,1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(例如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml,如果可能)混合,得到1 mL蛋白标记储备液。 
注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。 
注2: 应将蛋白质溶于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。 
注3:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得最佳标记结果。 
注4:如果蛋白质浓度小于2mg / mL,则结合效率显着降低。为获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
 
2.准备染料储备溶液(溶液B):
将无水DMSO加入到FITC-xtra小瓶中以制备10-20mM储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。 

注:在开始缀合之前准备染料储备溶液(溶液B)。及时使用。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。避免冻融循环。
 
3.准备所需的蛋白质结合物: 
注:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比率的蛋白质结合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 - 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。
 
3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到蛋白质的小瓶中溶液(95μl溶液A),有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。 
注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。
3.2进行结合反应。在有效摇动下将适量的染料储备溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1; 如果需要,分别为15:1和20:1。
3.4使用预制的旋转柱或其他技术纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种缀合物的染料/蛋白质比(DOS)(见下文)。
 
 
参考文献

Role of reactive oxygen species-mediated MAPK and NF-$\kappa$B activation in polygonatum cyrtonema lectin-induced apoptosis and autophagy in human lung adenocarcinoma A549 cells
Authors: Tao Liu, Lei Wu, Di Wang, Haiyang Wang, Jinwu Chen, Chunlan Yang, Jinku Bao, Chuanfang Wu
Journal: Journal of Biochemistry (2016): mvw040

Determination of sodium benzoate in food products by fluorescence polarization immunoassay
Authors: Linlin Ren, Meng Meng, Peng Wang, Zhihuan Xu, Sergei A Eremin, Junhong Zhao, Yongmei Yin, Rimo Xi
Journal: Talanta (2014): 136--143

Complexes containing cationic and anionic pH-sensitive liposomes: comparative study of factors influencing plasmid DNA gene delivery to tumors
Authors: Yan Chen, Ji Sun, Ying Lu, Chun Tao, Jingbin Huang, He Zhang, Yuan Yu, Hao Zou, Jing Gao, Yanqiang Zhong
Journal: International journal of nanomedicine (2013): 1573

Swimming behavior of the monotrichous bacterium Pseudomonas fluorescens SBW25
Authors: Liyan Ping, Jan Birkenbeil, Shamci Monajembashi
Journal: FEMS microbiology ecology (2013): 36--44



说明书
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素.pdf