Fura-10AM

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产品优势  

1.相较于单波长钙探针，能有效减少染料负载量差异、细胞渗漏及光漂白等因素的干扰。

2.无需丙磺舒（probenecid）的情况下即可实现信背比的显著提升

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

在比率型钙离子荧光探针中，Fura-2和Indo-1是目前最常用的两种。然而，这两种探针（特别是用于活细胞检测时）仍存在若干技术挑战：Fura-2的紫外激发会导致快速光漂白现象。数年前推出的Fura-8™将激发光谱红移至更接近可见光区域。虽然Fura-8在信背比方面表现出显著提升，但其在活细胞内的滞留性仍与Fura-2类似不甚理想。Fura-10正是为解决这一细胞滞留问题而设计，在无需丙磺舒（probenecid）的情况下即可实现信背比的显著提升。

适用仪器

操作步骤

储备液配制

所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。

Fura-10 AM储备液

使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-10 AM储备液。

工作液配制

Fura-10 AM工作液

实验当天，将Fura-10 AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura-10 AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura-10 AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

标准实验流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板加入1X Fura-10 AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

5.加入刺激剂后，立即使用集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em₁ = 355/530 nm截止475 nm和Ex/Em₂ = 415/530 nm截止475 nm检测荧光