Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对微孔板酶标仪进行了优化*

货号17623存储条件 Multiple
规格200 Tests价格2340
Ex (nm)498Em (nm)519
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒以简单准确的方式来检测单链 DNA。该试剂盒包含所有基本试剂,包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green ssDNA 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针,用于定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA (ssDNA)。它使科研人员能够量化低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。这种灵敏度超过吸光度方法的 10,000 倍以上。使用该试剂盒,可检测低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。使用该试剂盒对一些 ssDNA 进行了定量,包括具有相似灵敏度的 M13 和 φX174 病毒 DNA 以及变性小牛胸腺 DNA。它们的检测限不受核酸制剂中常见污染物的明显干扰,包括盐类、尿素、乙醇、氯仿、去污剂、蛋白质、ATP、核苷酸和六碱基短寡核苷酸等。然而,双链 DNA (dsDNA) 和 RNA 确实会干扰检测,因为 Helixyte Green ssDNA 试剂会与 dsDNA 和 RNA 结合以产生荧光信号。 Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒经过优化,可使用荧光酶标仪定量 dsDNA。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
Cutoff: 515nm


产品说明书

实验方案

概述

1.添加 100 µL ssDNA 标准品或测试样品
2.添加 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在室温下孵育 5-10 分钟
4.检测 Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注:以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量总核酸含量的示例。 打开前让所有成分升温至室温。 目前没有发现关于 Helixyte Green ssDNA 染色剂的致突变性或毒性的数据。 由于该试剂与核酸结合,因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。 应特别小心处理 DMSO 原液,因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

 

溶液制备

ssDNA 标准溶液
将 10 uL 100 ug/mL ssDNA 标准溶液(组分 C)添加到 190 uL 检测缓冲液(组分 B)中以获得 5 ug/mL 标准溶液,然后进行 1:3 稀释以获得连续稀释的 ssDNA 标准溶液(SS2- SS7)。请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

 

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

将 100 μL Helixyte Green ssDNA(组分 A)加入 10 mL 检测缓冲液(组分 B)中,制备 Helixyte Green ssDNA 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注意:建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液,因为染料可能会吸附到玻璃表面。为获得最佳效果,该溶液应在稀释后几小时内使用。
注意:10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。

 

操作步骤

表 1. 纯黑色 96 孔板中 ssDNA 标准品和测试样品的布局。 SS= ssDNA 标准品(SS1 - SS7,1667 至 2.3 ng/mL); BL=空白控制; TS=测试样品

 

BL BL TS TS
SS1 SS1 ... ...
SS2 SS2 ... ...
SS3 SS3    
SS4 SS4    
SS5 SS5    
SS6 SS6    
SS7 SS7    

 

表2.各孔试剂组成

体积 试剂
SS1-SS7 100ul 连续稀释(1667 至 2.3 ng/mL)
BL 100ul 缓冲液
TS 100ul 样品

 

1.根据表 1和表 2 中提供的布局准备 ssDNA 标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板,每孔使用 25 μL 试剂,而不是 100 μL。
2.将 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中,使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板,将 25 µL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个孔中,以获得 50 µL/孔的总体积。
3.在室温下孵育反应 5 到 10 分钟,避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm(Cutoff在 515 nm 处)的荧光酶标仪检测荧光增加。

 

图示

图 1. ssDNA 剂量反应是在 96 孔黑色孔板中使用 Amplite Fluorimetric ssDNA 定量试剂盒测量的。

 

参考文献

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说明书
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